公开(公告)号：CN107988256B

公开(公告)日：2020-07-28

申请号：CN201711251907.5

申请日：2017-12-01

Applicant: 暨南大学 ,  中国科学院广州生物医药与健康研究院

Inventor： 闫森 ,  李晓江 ,  赖良学 ,  李世华

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N15/877 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了一种人亨廷顿基因敲入用重组载体及其构建方法和在模型猪构建中的应用。本发明首次通过定点基因敲入人突变的亨廷顿外显子基因，且首次利用CRISPR/Cas9技术定点敲入致病基因，通过优化sgRNA，优化供体载体，提高了基因敲入阳性克隆细胞的概率，与猪体细胞核移植技术结合提高了直接获得阳性的基因敲入猪的概率，获得了人亨廷顿疾病基因敲入的小型猪，证明该方法用于构建基因修饰猪的高效可行性。本发明构建的亨廷顿基因敲入模型猪可产生典型的呼吸障碍、运动障碍等与人类亨廷顿疾病相类似的行为学特征并能进行稳定的可遗传的传代，为人类研究亨廷顿疾病提供可靠的模型，并能够确保数量以能用于药物筛选，以及基因治疗干细胞治疗等，可以成为人类良好的疾病模型。

公开(公告)号：CN108998452B

公开(公告)日：2019-11-19

申请号：CN201810756755.2

申请日：2018-07-11

Applicant: 暨南大学

Inventor： 郭祥玉 ,  杨伟莉 ,  李世华 ,  李晓江

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/90 ,  C12N9/22 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明提供了一种脑黑质基因敲除快速建立帕金森病动物模型的方法。本发明公开了一种可高效特异敲除PINK1基因的sgRNA；还提供了通过靶向敲除动物中脑黑质的PINK1基因建立帕金森疾病动物模型的方法，具体通过将sgRNA和CRISPR核酸酶注射至动物大脑黒质部位，对PINK1基因造成目标片段缺失；3～4周后可出现明显帕金森疾病典型运动障碍症状，无药物治疗下运动障碍不可恢复。所述方法直接造成黑质部位神经元死亡，无副作用，成模率逾90％，表型稳定，适用性和重复性好，为帕金森病药物筛选、干细胞治疗、基因缺陷修复治疗及PINK1基因缺失的致病机理研究等提供重要模型，具有巨大的经济价值和临床前研究意义。

公开(公告)号：CN118360334B

公开(公告)日：2024-09-24

申请号：CN202410774807.4

申请日：2024-06-17

Applicant: 暨南大学

Inventor： 殷鹏 ,  李晓江 ,  贾青青 ,  李世华 ,  侯珺淇 ,  朱高路 ,  欧凯丽 ,  何大健 ,  赵月

IPC: C12N15/85 ,  A01K67/0278 ,  A61K49/00 ,  C12N15/57

Abstract: 本发明公开了一种基于CASP4构建的模拟ALS疾病的模型及方法，属于生物技术领域。其构建过程如下：（1）构建CASP4基因敲入的打靶片段；（2）将gRNA、Cas9 mRNA和打靶片段注射至小鼠受精卵中，培育受精卵并进行传代，获得CASP4基因稳定遗传的hCASP4flox小鼠；（3）然后再与Cre工具鼠交配，获得双阳性杂合小鼠，即为CASP4基因特异表达在神经系统的小鼠模型。本发明基于人源化CASP4基因构建了模拟ALS疾病的动物模型，能够有效避免该凋亡因子所引起的小鼠死亡，并获得TDP‑43小片段产物累积在细胞浆中，且同时呈现出核内TDP‑43缺失病症的ALS小鼠模型。

公开(公告)号：CN118217273A

公开(公告)日：2024-06-21

申请号：CN202410651857.3

申请日：2024-05-24

Applicant: 暨南大学

Inventor： 殷鹏 ,  李晓江 ,  张晨 ,  王翔 ,  李世华 ,  欧凯丽 ,  贾青青 ,  侯珺淇 ,  朱龙洪

IPC: A61K31/345 ,  A61P25/28 ,  A61P25/14

Abstract: 本发明公开了NSC697923在制备清除错误折叠蛋白聚集物药物上的应用，属于医药技术领域。本发明技术方案首次将NSC697923应用到大脑神经系统毒性蛋白聚集体的清除上，有效降低了AD小鼠和HD小鼠脑内的错误折叠蛋白聚集物水平，并明显改善了AD小鼠和HD小鼠相对于健康小鼠异常表达的基因。因此，本发明将UBE2N抑制剂NSC69792用于制备神经退行性疾病的药物组合物，为进一步药物研发奠定了基础，尤其是在阿尔兹海默症和亨廷顿舞蹈症的靶向治疗上，有着潜在的治疗应用前景。

公开(公告)号：CN114903010B

公开(公告)日：2024-06-07

申请号：CN202210545641.X

申请日：2022-05-19

Applicant: 暨南大学 ,  中国科学院广州生物医药与健康研究院

Inventor： 闫森 ,  黄春辉 ,  郑潇 ,  李晓江 ,  赖良学 ,  李世华 ,  李彩娟 ,  林颖琪 ,  刘朝明

IPC: A01K67/02 ,  A61K49/00

Abstract: 本发明涉及一种神经退行性疾病模型的构建方法。该构建方法包括以下步骤：将可表达与人神经退行性疾病相关的异常蛋白的病毒载体静脉注射到血脑屏障未完全形成的动物体内后饲养，制备神经退行性疾病模型。上述构建方法无需提前繁殖达到一定规模，无需保种，试验周期短，成本较低；并且采用静脉注射的方式可以随时随地进行造模，造模方便操作简单。此外，按照上述构建方法制得的肌萎缩侧索硬化症模型可代表大部分病人的病理特征。

公开(公告)号：CN116410311B

公开(公告)日：2023-12-12

申请号：CN202310281290.0

申请日：2023-03-22

Applicant: 暨南大学

Inventor： 闫森 ,  李世华 ,  李彩娟 ,  李晓江 ,  林颖琪

IPC: C07K16/18 ,  C07K19/00 ,  C12N15/70 ,  C12N15/85 ,  A61K39/395 ,  A61P25/00 ,  A61P25/14 ,  A61P25/16 ,  A61P25/28

Abstract: 本申请涉及一种胞内抗体及其制备方法和用途，该胞内抗体包括识别mHTT的单克隆抗体的可变区重链的片段和溶酶体膜相关蛋白Ⅰ的信号序列，所述可变区重链的片段包括SEQ.ID NO.1～3中任意一个所示的氨基酸序列。本申请提供的Intrabody具有双向识别功能，不仅可以识别和结合mHTT，还能够特异性识别溶酶体，实现突变蛋白的靶向降解，提高突变蛋白降解效率。

公开(公告)号：CN115044558B

公开(公告)日：2023-08-11

申请号：CN202210698709.8

申请日：2022-06-20

Applicant: 暨南大学

Inventor： 闫森 ,  李彩娟 ,  李世华 ,  李晓江

IPC: C12N5/0793 ,  C12N15/864 ,  C12N15/12 ,  C12N5/10 ,  C12Q1/02

Abstract: 本发明涉及一种猪神经元及其分离培养方法和应用。该猪神经元的分离培养方法包括以下步骤：将猪大脑消化，制备分散的神经元；及将神经元接种于改良培养基中培养，其中，改良培养基包括神经细胞基础培养基、质量百分含量为1％～3％的添加剂、1mM～3mM的L‑谷氨酰胺和15μg/mL～25μg/mL的抗生素，添加剂为B‑27添加剂或无氧化剂的B‑27添加剂。上述的分离培养方法能够分离猪神经元且在培养过程中可见神经突起的生长，能够用于人类的神经退行性疾病研究。

公开(公告)号：CN115044558A

公开(公告)日：2022-09-13

申请号：CN202210698709.8

申请日：2022-06-20

Applicant: 暨南大学

Inventor： 闫森 ,  李彩娟 ,  李世华 ,  李晓江

IPC: C12N5/0793 ,  C12N15/864 ,  C12N15/12 ,  C12N5/10 ,  C12Q1/02

Abstract: 本发明涉及一种猪神经元及其分离培养方法和应用。该猪神经元的分离培养方法包括以下步骤：将猪大脑消化，制备分散的神经元；及将神经元接种于改良培养基中培养，其中，改良培养基包括神经细胞基础培养基、质量百分含量为1％～3％的添加剂、1mM～3mM的L‑谷氨酰胺和15μg/mL～25μg/mL的抗生素，添加剂为B‑27添加剂或无氧化剂的B‑27添加剂。上述的分离培养方法能够分离猪神经元且在培养过程中可见神经突起的生长，能够用于人类的神经退行性疾病研究。

公开(公告)号：CN118360334A

公开(公告)日：2024-07-19

申请号：CN202410774807.4

申请日：2024-06-17

Applicant: 暨南大学

Inventor： 殷鹏 ,  李晓江 ,  贾青青 ,  李世华 ,  侯珺淇 ,  朱高路 ,  欧凯丽 ,  何大健 ,  赵月

IPC: C12N15/85 ,  A01K67/0278 ,  A61K49/00 ,  C12N15/57

Abstract: 本发明公开了一种基于CASP4构建的模拟ALS疾病的模型及方法，属于生物技术领域。其构建过程如下：（1）构建CASP4基因敲入的打靶片段；（2）将gRNA、Cas9 mRNA和打靶片段注射至小鼠受精卵中，培育受精卵并进行传代，获得CASP4基因稳定遗传的hCASP4flox小鼠；（3）然后再与Cre工具鼠交配，获得双阳性杂合小鼠，即为CASP4基因特异表达在神经系统的小鼠模型。本发明基于人源化CASP4基因构建了模拟ALS疾病的动物模型，能够有效避免该凋亡因子所引起的小鼠死亡，并获得TDP‑43小片段产物累积在细胞浆中，且同时呈现出核内TDP‑43缺失病症的ALS小鼠模型。

公开(公告)号：CN117777297A

公开(公告)日：2024-03-29

申请号：CN202311700819.4

申请日：2023-12-11

Applicant: 暨南大学

Inventor： 杨伟莉 ,  李晓江 ,  陈秀生 ,  李世华 ,  殷鹏 ,  何大健 ,  熊鑫 ,  王琦 ,  韩瑞 ,  王志富

IPC: C07K16/40 ,  G01N33/577 ,  G01N33/573 ,  G01N33/58

Abstract: 本发明公开了一种抗内源性PINK1蛋白的单克隆抗体及其应用，所述的单克隆抗体，其重链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID No.1～3所示；其轻链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID No.4～5和LVS所示。所述的单克隆抗体可用于对PINK1蛋白的识别和检测，用于非临床诊断目的；也可用于制备识别和检测PINK1蛋白的试剂和试剂盒。本发明通过人工构建PINK1基因序列片段，将其导入大肠杆菌中进行原核表达，收取、纯化PINK1多肽片段，并用其免疫小鼠，制备单克隆抗体，最终筛选得到能与PINK1蛋白特异性结合的杂交瘤细胞株2E7B6。所述抗体能与人和食蟹猴的PINK1蛋白特异性结合，表现出较好的实验性能。