公开(公告)号：CN103734016B

公开(公告)日：2016-06-08

申请号：CN201410027435.5

申请日：2014-01-21

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张蜀宁 ,  郑于莉 ,  李英 ,  徐丽娟 ,  王雅美 ,  侯喜林

IPC: A01H4/00

Abstract: 本发明属农作物育种领域，公开了一种离体诱导同源四倍体青花菜的育种方法。该育种方法是以青花菜子叶期保留下胚轴0.4‐0.6cm的幼苗为外植体，将外植体接种至含秋水仙素的双层分化培养基上诱导培养45‐50h，直接诱导产生四倍体芽，进而可以快速稳定的获得同源四倍体青花菜。本发明首次采用液体培养基（添加秋水仙素）与固体培养基（不添加秋水仙素）双层诱导并结合处理青花菜子叶期保留下胚轴0.4‐0.6cm的幼苗的无性多倍化育种途径，获得四倍体青花菜新种质。其优点是诱导率高，嵌合体少，死亡率低，污染率低，并且获得的四倍体材料能通过分生增殖获得大量的四倍体植株，极大的缩短了诱导时间。

公开(公告)号：CN103947536A

公开(公告)日：2014-07-30

申请号：CN201310643390.X

申请日：2013-12-03

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张蜀宁 ,  李英 ,  孙成振 ,  郑金双 ,  王雅美 ,  侯喜林

IPC: A01H1/02 ,  A01H4/00

Abstract: 本发明公开了一种不结球白菜与萝卜远缘杂交新种质创制方法。该育种方法是以同源四倍体不结球白菜为母本，以同源四倍体萝卜为父本，进行人工有性杂交育种，利用重复授粉以及离体胚挽救技术，获得同源四倍体不结球白菜与同源四倍体萝卜远缘杂交新种质。本发明首次采用同源四倍体不结球白菜与同源四倍体萝卜有性杂交育种途径以及离体胚挽救技术，获得远缘杂交新种质，与传统二倍体间杂交获得合子胚再进行倍性加倍相比，无需进行染色体加倍操作，能显著缩短育种时间，且杂种F1能稳定遗传。本发明创制的新种质具有不结球白菜与萝卜遗传物质，具有更广泛的遗传多样性。

公开(公告)号：CN101946696B

公开(公告)日：2012-10-03

申请号：CN201010529852.1

申请日：2010-11-03

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 张蜀宁 ,  李英 ,  侯喜林 ,  钟程 ,  于旭红 ,  李式军 ,  刘惠吉

IPC: A01H1/02 ,  A01H1/08 ,  A01H5/00

Abstract: 本发明属农作物育种领域，公开了一种四倍体不结球白菜的有性多倍化育种方法。该育种方法是在二倍体不结球白菜抽薹期使用秋水仙素溶液处理花蕾诱导产生2n雄配子；以四倍体雄性不育系为母本，以所述的秋水仙素诱导得到的含2n雄配子的二倍体为父本在花期进行人工有性多倍化杂交育种，获得所述的四倍体不结球白菜。本发明首次采用四倍体不结球白菜雄性不育系×诱变产生2n配子的二倍体不结球白菜的有性多倍化育种途径，获得四倍体不结球白菜新种质，与无性多倍化的同源四倍体相比具有更广泛的遗传多样性，更高的结实率。本发明新四倍体具有多倍体的巨大性、抗病性、耐寒性，品质好，还具有二倍体父本的性状。

公开(公告)号：CN102349443A

公开(公告)日：2012-02-15

申请号：CN201110201936.7

申请日：2011-07-19

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 侯喜林 ,  于文佳

IPC: A01H4/00

Abstract: 本发明公开了一种提高小菘菜游离小孢子胚胎发生率的方法。一种提高小菘菜游离小孢子胚胎发生率的方法，选取小菘菜单核靠边期的花蕾，消毒后分离纯化出小孢子，将纯化后的小孢子悬浮于高糖培养基中，调整小孢子的密度达到1×105～1×106个/ml，置于33℃-35℃下黑暗处理12h-24h，离心弃上清后，加入低糖培养基，获得小孢子悬浮液。小孢子悬浮液于黑暗处理10d-14d后即可出现肉眼可见的胚状体，将其置于振荡培养箱中培养，出现子叶型胚后立即放于光照下转绿，然后接到分化培养基上继代进而形成再生植株。通过本发明改良后的小孢子培养方法，使对常规培养没有反应的小菘菜品种产生了胚状体，诱导基因型成功率达到60％。

公开(公告)号：CN101338341A

公开(公告)日：2009-01-07

申请号：CN200810123996.X

申请日：2008-06-16

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 李英 ,  单晓政 ,  侯喜林 ,  王建军

IPC: C12Q1/68

Abstract: 本发明提供了不结球白菜高Vc含量基因的分子标记方法，属于分子遗传学领域。对不结球白菜高Vc含量品种‘常州乌塌菜’和低Vc含量品种‘二青’进行RAPD分子标记的筛选，获得与不结球白菜高Vc含量基因连锁的一个标记AW5561，对该特异片段进行测序分析，并将其转化为稳定的SCAR标记，即SCAW5532。通过本发明提供的分子标记，可有效开展不结球白菜高Vc含量品种的选育，大大提高选择效率，从而加快育种进程。

公开(公告)号：CN101135642A

公开(公告)日：2008-03-05

申请号：CN200710132681.7

申请日：2007-09-18

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 侯喜林 ,  成妍

IPC: G01N21/64 ,  G01N15/00

Abstract: 本发明涉及一种不结球白菜游离小孢子再生植株的倍性鉴定方法，属于生物技术领域。包括单细胞悬浮液的制备，采用美国BeckMAN COULTER公司生产的Epics XL型号的流式细胞仪，流式细胞仪倍性分析，发光源为488nm氩离子空冷激光；测定DNA分子荧光强度，待测植株峰值处在140附近的视为二倍体，而处在70和280附近的分别视为单倍体和四倍体。流式细胞仪倍性检测结果与在成株期进行花期形态鉴别相一致。应用此法，可在幼苗期快速鉴定出不结球白菜游离小孢子再生植株的倍性，大大提高DH群体构建和遗传图谱绘制的效率，从而加速了育种进程。

公开(公告)号：CN100348735C

公开(公告)日：2007-11-14

申请号：CN200610086161.2

申请日：2006-09-06

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 侯喜林 ,  史公军

IPC: C12Q1/68 ,  C12N15/11 ,  C12P19/34

Abstract: 本发明涉及一种不结球白菜雄性不育分子标记辅助选择方法，属于生物技术领域，用于不结球白菜胞质雄性不育系的分子标记辅助选择育种。用标记引物OPAG20，或者用标记引物SCAG20，扩增不结球白菜胞质雄性不育系或育种材料线粒体DNA，如果能够扩增出700bp的片段，均标志着不结球白菜胞质雄性不育基因的存在。本发明对不结球白菜胞质雄性不育系98HA及其保持系98HB线粒体DNA进行RAPD及SCAR分子标记的筛选，可有效开展不结球白菜胞质雄性不育系的分子标记辅助选育，大大提高选择效率，从而加快育种进程。

公开(公告)号：CN1328364C

公开(公告)日：2007-07-25

申请号：CN200410064680.X

申请日：2004-09-20

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 侯喜林 ,  汪舟明 ,  王建军 ,  孙智华

IPC: C11B1/10

Abstract: 本发明超临界二氧化碳提取洋葱油的方法，属于农副产品加工领域，专用于洋葱深度加工，其原料和工艺为，将洋葱干燥、粉碎，超临界CO2萃取(38℃、19Mpa、150kg/h)，得到洋葱油，纯度在99%以上，得率3.1～3.9‰。本发明为洋葱的深度加工提供了一种新方法，可操作性强，安全性好，活性成分破坏少，得率较高，重复性好。

公开(公告)号：CN1613987A

公开(公告)日：2005-05-11

申请号：CN200410064680.X

申请日：2004-09-20

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 侯喜林 ,  汪舟明 ,  王建军 ,  孙智华

IPC: C11B1/10

Abstract: 本发明超临界二氧化碳提取洋葱油的方法，属于农副产品加工领域，专用于洋葱深度加工，其原料和工艺为，将洋葱干燥、粉碎，超临界CO2萃取(38℃、19Mpa、150kg/h)，得到洋葱油，纯度在99％以上，得率3.1～3.9‰。本发明为洋葱的深度加工提供了一种新方法，可操作性强，安全性好，活性成分破坏少，得率较高，重复性好。

公开(公告)号：CN1232608A

公开(公告)日：1999-10-27

申请号：CN99114125.3

申请日：1999-03-29

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 侯喜林 ,  曹寿椿

IPC: A01H1/08 ,  A01H5/00

Abstract: 本发明属于不结球白菜非对称细胞融合方法及其获得的再生植株,专用于新种质的创建。包括:原生质体的制备、OguCMS下胚轴原生质体核失活处理、保持系子叶原生质体的钝化处理(线粒体)非对称原生质体的电融合和融合产物的培养。获得再生植株后代98H秋－45为新种质,其不育率、不育度均为100%,低温下苗期叶片不黄化,结实率与保持系相同,并极显著高于原不育材料;经PCR扩增cpDNA和mtDNA的电泳证实为体细胞杂种。