一种检测革兰氏阴性细菌启动子转录活性的报告基因质粒载体、质粒及应用

    公开(公告)号:CN118308395A

    公开(公告)日:2024-07-09

    申请号:CN202410466807.8

    申请日:2024-04-18

    Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域,具体涉及一种检测革兰氏阴性菌启动子转录活性的报告基因质粒载体、质粒及应用;本发明报告基因质粒载体包括pFA‑Gm和/或pFA‑Kan质粒,pFA‑Gm质粒包括复制子元件、mob元件以及筛选标记庆大霉素抗性基因,pFA‑Gm质粒的多克隆位点区域两侧分别含有大肠杆菌编码核糖体RNA的rrnB基因的终止区T1和T2,pFA‑Gm质粒的多克隆位点的3′端方向含有1×Flag标签;报告基因质粒为将报告基因片段连接到报告基因质粒载体上而得到;本发明通过报告基因质粒实现对革兰氏阴性细菌中基因启动子转录活性的评估,较实时荧光定量PCR技术的成本以及操作难度更低。

    一种监测悬浮培养杆状病毒表达系统抗原表达量的方法

    公开(公告)号:CN115877015B

    公开(公告)日:2023-08-15

    申请号:CN202310037654.0

    申请日:2023-01-09

    Abstract: 本发明公开了一种监测悬浮培养杆状病毒表达系统抗原表达量的方法。属于疫苗生产过程控制技术领域。包括首先确定目的蛋白表达量达到目标标准时的阳性细胞比率,作为在生产中监测抗原含量合格时的标准,然后在实际生产中从接毒后第2天开始对悬浮培养细胞每隔24小时取样检测阳性细胞比率,当阳性细胞比率达到抗原合格的标准时即可停止取样检测。本发明可以相对实时监测悬浮培养工艺杆状病毒表达系统中目的蛋白表达过程,并提前确定当前批次细胞悬液的目的蛋白含量能否合格,便于进行后序的操作,有利于生产过程的控制,降低生产成本。对所有用悬浮细胞进行杆状病毒培养表达蛋白的工艺均可适用,在生产实践中具有非常大的指导意义。

    一种监测悬浮培养杆状病毒表达系统抗原表达量的方法

    公开(公告)号:CN115877015A

    公开(公告)日:2023-03-31

    申请号:CN202310037654.0

    申请日:2023-01-09

    Abstract: 本发明公开了一种监测悬浮培养杆状病毒表达系统抗原表达量的方法。属于疫苗生产过程控制技术领域。包括首先确定目的蛋白表达量达到目标标准时的阳性细胞比率,作为在生产中监测抗原含量合格时的标准,然后在实际生产中从接毒后第2天开始对悬浮培养细胞每隔24小时取样检测阳性细胞比率,当阳性细胞比率达到抗原合格的标准时即可停止取样检测。本发明可以相对实时监测悬浮培养工艺杆状病毒表达系统中目的蛋白表达过程,并提前确定当前批次细胞悬液的目的蛋白含量能否合格,便于进行后序的操作,有利于生产过程的控制,降低生产成本。对所有用悬浮细胞进行杆状病毒培养表达蛋白的工艺均可适用,在生产实践中具有非常大的指导意义。

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