公开(公告)号：CN1827779A

公开(公告)日：2006-09-06

申请号：CN200510048736.7

申请日：2005-12-22

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 李凡 ,  王钰丽 ,  陈海如 ,  孙健 ,  蔡红 ,  吴建宇 ,  秦西云 ,  孔宝华 ,  兰平秀 ,  杨金广

IPC: C12Q1/68

Abstract: 本发明提供一种烟草扭脉病毒检测方法，属植物保护领域。根据烟草扭脉病毒核苷酸序列设计的特异性引物TVCPF/TVCPR，提取植株组织的总RNA后，采用RT－PCR的方法，检测烟草扭脉病毒。该发明能有效克服指示植物法、电镜技术、酶联免疫技术和总核酸提取法的缺点，方便、特异、灵敏的检测烟草扭脉病毒。

公开(公告)号：CN1824791A

公开(公告)日：2006-08-30

申请号：CN200510048767.2

申请日：2005-12-27

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 黄琼 ,  陈海如 ,  王云月 ,  焦玉霞 ,  邵思胜 ,  杜静 ,  尹明权 ,  赵莹莹

IPC: C12Q1/04

Abstract: 本发明涉及一种植物病原真菌致病性的快速鉴定方法，属微生物技术领域。以甘薯长喙壳菌在芋头片上的生长代替对原寄主(石榴苗)的接种，快速鉴定病菌菌株的致病性。本发明具有如下优点：效率高，可在短时间内对大量菌株进行致病性鉴定。操作简单，价格便宜。结果可靠，效果直观，极大地提高了工作效率。

公开(公告)号：CN100538339C

公开(公告)日：2009-09-09

申请号：CN200510048726.3

申请日：2005-12-22

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 李凡 ,  孙健 ,  陈海如 ,  李正跃 ,  王钰丽 ,  刘云龙 ,  范静华 ,  姬广海 ,  孔宝华 ,  王扬 ,  杨斌 ,  蒋小龙 ,  白松 ,  蔡红 ,  胡先奇

IPC: G01N21/64 ,  G01N21/78 ,  G01N27/447 ,  C12Q1/02 ,  G01N1/28

Abstract: 本发明提供了一种同步检测百合斑驳病毒(LMoV)、百合无症病毒(LSV)和黄瓜花叶病毒(CMV)的方法，属植物保护领域。其方案是，通过提取总RNA、多重RT-PCR以及电泳检测等步骤，在同一反应管及同一个热循环条件下对百合感染的LMoV、LSV和CMV三种病毒中的1～3种进行扩增，并通过凝胶电泳进行分离和检测。该方法除了具有普通RT-PCR具有的快速、特异、灵敏的优点外，主要是实现了三种病毒同步检测，降低了成本。

公开(公告)号：CN100487431C

公开(公告)日：2009-05-13

申请号：CN200510048727.8

申请日：2005-12-22

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 李凡 ,  王钰丽 ,  陈海如 ,  蔡红 ,  孙健 ,  吴建宇 ,  吴德喜 ,  秦西云 ,  杨根华 ,  程建勇 ,  马琨玲 ,  钱宁刚 ,  兰平秀 ,  杨金广

IPC: G01N21/64 ,  G01N21/78 ,  G01N27/447 ,  C12Q1/00 ,  G01N1/28

Abstract: 本发明提供一种同步检测烟草丛顶病毒和烟草扭脉病毒的方法，属植物保护领域。根据烟草丛顶病毒和烟草扭脉病毒核苷酸序列分别设计两对特异性引物TB2F/TB2R(检测烟草丛顶病毒)及TVCPF/TVCPR(检测烟草扭脉病毒)。提取植株组织的总RNA后，采用双重RT-PCR的方法，同步检测烟草丛顶病毒和烟草扭脉病毒。该发明能有效克服指示植物法、电镜技术、酶联免疫技术以及总核酸提取法和传统RT-PCR方法的缺点，只用相当于一次普通RT-PCR的时间和试剂，就可以方便、特异、灵敏的同步检测烟草丛顶病毒和烟草扭脉病毒。

公开(公告)号：CN1824800A

公开(公告)日：2006-08-30

申请号：CN200510048772.3

申请日：2005-12-27

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 李凡 ,  陈精兰 ,  陈海如 ,  李正跃 ,  孙健 ,  王钰丽 ,  刘云龙 ,  范静华 ,  王扬 ,  姬广海 ,  孔宝华 ,  蔡红 ,  杨斌 ,  蒋小龙 ,  白松

IPC: C12Q1/68

Abstract: 本发明提供了一种免疫捕获反转录PCR检测李坏死环斑病毒(PNRSV)的方法，属植物保护领域。其方案是，通过抗体特异捕获抗原、RT－PCR以及电泳检测等步骤，对植物中感染的李坏死环斑病毒进行扩增，并通过凝胶电泳进行分离和检测。该方法除了具有普通RT－PCR所具有的快速、特异的优点外，主要是实现了血清学与分子生物学技术的结合，先通过病毒抗体对抗原病毒的特异吸附，将植物中低浓度的病毒进行富集，再通过PCR进行扩增，从而使检测的灵敏度和特异性得到极大的提高，并降低了病毒的漏检率。

公开(公告)号：CN1793859A

公开(公告)日：2006-06-28

申请号：CN200510048727.8

申请日：2005-12-22

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 李凡 ,  王钰丽 ,  陈海如 ,  蔡红 ,  孙健 ,  吴建宇 ,  吴德喜 ,  秦西云 ,  杨根华 ,  程建勇 ,  马琨玲 ,  钱宁刚 ,  兰平秀 ,  杨金广

IPC: G01N21/64 ,  G01N21/78 ,  G01N27/447 ,  C12Q1/00 ,  G01N1/28

Abstract: 本发明提供一种同步检测烟草丛顶病毒和烟草扭脉病毒的方法，属植物保护领域。根据烟草丛顶病毒和烟草扭脉病毒核苷酸序列分别设计两对特异性引物TB2F/TB2R(检测烟草丛顶病毒)及TVCPF/TVCPR(检测烟草扭脉病毒)。提取植株组织的总RNA后，采用双重RT－PCR的方法，同步检测烟草丛顶病毒和烟草扭脉病毒。该发明能有效克服指示植物法、电镜技术、酶联免疫技术以及总核酸提取法和传统RT－PCR方法的缺点，只用相当于一次普通RT－PCR的时间和试剂，就可以方便、特异、灵敏的同步检测烟草丛顶病毒和烟草扭脉病毒。

公开(公告)号：CN108990586A

公开(公告)日：2018-12-14

申请号：CN201810620243.3

申请日：2018-06-15

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 李凡 ,  马龑 ,  刘芳 ,  李涛 ,  吕婧 ,  谭松涛 ,  刘琴利 ,  李月月 ,  肖啟海 ,  陈海如

IPC: A01G7/06

Abstract: 本发明涉及一种注射接种获得感染云南烟草丛顶病4种病原物病株的方法，属于植物病害技术领域，具体步骤为：取0.5 g携带云南烟草丛顶病4种病原物的植物组织用液氮研磨成粉末，再加入PBS缓冲液研磨，所得匀浆离心待注射；在植株叶片上扎孔注射；注射接种半个月后，进行症状观察以及RT-PCR检测，即可获得感染4种云南烟草丛顶病病原物的活体样本。本发明能高效的将云南烟草丛顶病4种病原物同时接种在健康植株上，突破通过摩擦接种不能把云南烟草丛顶病4种病原物均接种在健康植株上的技术屏障，避免了利用蚜虫传毒必须从活体植株获毒的限制以及因蚜虫传毒效率差异而引起试验误差的缺陷，丰富了接种所需带毒植物组织的保存方式。

公开(公告)号：CN103283718B

公开(公告)日：2015-10-07

申请号：CN201310277223.8

申请日：2013-07-04

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 陈兴全 ,  陈海如 ,  蔡红 ,  杨根华 ,  秦西云

IPC: A01N3/00

Abstract: 本发明涉及一种烟草病害标本制作方法，属于物种生物学领域。采用NaHCO3代替HCOOH及Cu(HCOO)2处理植物标本，处理后的颜色成淡绿色，保色效果比现有技术处理的标本更接近原色，可长时间的保留供教学、科研用，克服了在教学中用挂图的死板，弥补了新鲜标本容易损坏及课时进度与季节脱节而导致选材困难等不足，不仅使用方便、效果明显且具有一定的艺术性和观赏价值，同时，原料丰富、制作过程中无刺激性气味，环保健康、制作成本较低、操作简单，可控性高，实用性强。

公开(公告)号：CN1828275A

公开(公告)日：2006-09-06

申请号：CN200510048724.4

申请日：2005-12-22

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 李凡 ,  王钰丽 ,  陈海如 ,  孙健 ,  蔡红 ,  吴德喜 ,  程建勇 ,  杨根华 ,  马琨玲 ,  钱宁刚

IPC: G01N21/64 ,  G01N21/78 ,  B01D57/02 ,  C12Q1/00

Abstract: 本发明提供一种烟草丛顶病毒检测方法，属植物保护领域。根据烟草丛顶病毒核苷酸序列设计特异性引物TB2F/TB2R，提取总RNA后采用RT－PCR的方法，直接检测烟草丛顶病毒。本发明能有效克服指示植物法、电镜技术、酶联免疫技术以及总核酸提取法的缺点，方便、特异、灵敏的检测烟草丛顶病毒。

公开(公告)号：CN1824798A

公开(公告)日：2006-08-30

申请号：CN200510048729.7

申请日：2005-12-22

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 蔡红 ,  陈海如 ,  孔宝华 ,  范静华 ,  李凡 ,  和志娇 ,  刘涛 ,  杨根华

IPC: C12Q1/68

Abstract: 本发明涉及一种植原体PCR检测试剂盒及其检测方法，专用于16SrII组植原体的检测。试剂盒包括PCR常用反应试剂，主要有PCR反应缓冲液、MgCl2、dNTPs、TaqDNA聚合酶、植原体16S rRNA基因通用引物及16SrII组植原体的特异引物。检测方法包括PCR反应及电泳检测。含有16SrII组植原体的样品电泳检测结果可观察到1500bp和990bp的二条特异扩增条带，而非16SrII组植原体的样品电泳检测结果只能观察到1500bp的扩增条带。本试剂盒使用方便，具有较高的特异性和检测灵敏度。可直接检测植原体病害样品，又可对属于16SrII组的植原体进行鉴定。