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公开(公告)号：CN111996201B
公开(公告)日：2021-07-13
申请号：CN202010212907.X
申请日：2020-03-24
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 郑海学 , 杨帆 , 曹伟军 , 蒋保余 , 朱紫祥 , 魏婷 , 郑敏 , 田宏 , 张克山 , 张伟 , 刘永杰 , 党文 , 马旭升 , 李丹 , 茹毅 , 何继军 , 郭建宏 , 刘湘涛
IPC: C12N15/41 , C12N15/42 , C12N7/01 , C12N15/85 , A61K39/125 , A61K39/135 , A61P31/14
Abstract: 本发明提供一种重组A型口蹄疫病毒VP1基因的塞内卡重组病毒、重组疫苗株及其制备方法和应用，涉及基因工程技术领域。本发明提供了塞内卡病毒重组核酸、包含所述重组核酸的塞内卡重组病毒、包含所述塞内卡重组病毒的塞内卡重组疫苗株及其制备方法和应用。本发明对SVV/FJ/001株基因缺失突变改造，在其cDNA中融合进A型FMDV的VP1基因，得到塞内卡重组病毒，该重组病毒能够表达融合进的基因，且表达产物具有良好的反应原性；获得的疫苗株抗原产能高，致病性显著降低甚至对猪无致病性，灭活疫苗免疫动物后不仅能激发SVA的免疫应答，而且能产生针对融合基因的免疫活性，可用于塞内卡病毒及一种或多种非塞内卡病毒的防控。
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公开(公告)号：CN112353939A
公开(公告)日：2021-02-12
申请号：CN202011232798.4
申请日：2020-11-06
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: A61K45/00 , A61K31/713 , A61P37/06 , A61P31/14 , C12N7/01 , C12N15/867 , C12N5/10 , C12R1/91
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及GTPBP4蛋白作为免疫抑制剂的应用及敲低或过表达GTPBP4细胞系的构建。首先本发明意外发现，GTPBP4抑制SeV(仙台病毒)诱导的IFN‑β启动子的激活，以及IFN‑β及其下游基因的mRNA表达，抑制SeV诱导的IFN‑β蛋白表达；靶向IRF3(干扰素反应因子3)抑制天然免疫。其次，在细胞系中过表达GTPBP4蛋白，显著促进塞内卡病毒VP1蛋白的表达，提高了塞内卡病毒滴度，可用于塞内卡病毒及疫苗生产细胞系的构建；最后，在细胞系中敲低GTPBP4蛋白，明显抑制塞内卡病毒VP1蛋白的表达，降低了塞内卡病毒的滴度，可用于抗塞内卡病毒感染的动物育种；并且GTPBP4蛋白抑制剂可用于制备预防或治疗小核糖核酸病毒科病毒感染药物、药物组合物或疫苗组合物。
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公开(公告)号：CN112076314A
公开(公告)日：2020-12-15
申请号：CN202011020241.4
申请日：2020-09-24
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 茹毅 , 刘华南 , 张贵财 , 杨帆 , 李丹 , 郭建宏 , 何继军 , 张娇燕 , 李亚军 , 马坤 , 伍春平 , 郝荣增 , 卢炳州 , 田宏 , 朱紫祥 , 张克山 , 曹伟军 , 刘永杰 , 靳野 , 马旭升 , 党文
Abstract: 本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种A型口蹄疫亚单位疫苗及其制备方法和应用。本发明以我国2013年A型口蹄疫病毒流行株(A/GDMM/2013)的三种结构蛋白VP0、VP3和VP1的氨基酸序列为基础进行优化设计，并借助小泛素样融合蛋白(SUMO)，筛选出单个质粒在大肠杆菌中同时高效、均一、可溶性表达这三种结构蛋白，且三种病毒结构蛋白成功在体外自组装；最终获得的目标蛋白约占菌体总蛋白30％以上，纯化后目标蛋白产量最高可达150mg/L。用本发明方法制备的口蹄疫疫苗，对我国A型口蹄疫流行毒具有良好的保护作用，疫苗最小全保护免疫剂量可低至20μg/头份。
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公开(公告)号：CN112057611A
公开(公告)日：2020-12-11
申请号：CN202010932707.1
申请日：2020-09-08
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及非洲猪瘟病毒E120R蛋白作为免疫抑制剂的应用及免疫抑制位点敲除毒株的构建。本发明首先发现了非洲猪瘟病毒E120R蛋白能够抑制cGAS/STING和poly(dA:dT)诱导的IFN‑β的激活，抑制cGAS/STING和poly(dA:dT)诱导的IFN‑β及其下游因子ISG56和ISG15的mRNA表达，抑制cGAS/STING和poly(dA:dT)诱导的IRF3的磷酸化，具有较强的免疫抑制作用，可作为免疫抑制剂应用；其次本发明发现了非洲猪瘟病毒E120R蛋白的免疫抑制位点，并通过基因工程手段构建获得了E120R蛋白的免疫抑制位点敲除的非洲猪瘟重组病毒，所述非洲猪瘟重组病毒的天然免疫的能力显著增强，可作为重组疫苗株，能够促进早期免疫应答，诱导高水平抗体产生，提高了生物安全性，及免疫保护效力，具备良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN111996203A
公开(公告)日：2020-11-27
申请号：CN202010212917.3
申请日：2020-03-24
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Inventor： 郑海学 , 杨帆 , 曹伟军 , 朱紫祥 , 宁建刚 , 马坤 , 郝荣增 , 张伟 , 郑敏 , 魏婷 , 蒋保余 , 田宏 , 张克山 , 党文 , 马旭升 , 李丹 , 茹毅 , 何继军 , 郭建宏 , 刘湘涛
IPC: C12N15/41 , C12N15/42 , C12N7/01 , C12N15/85 , A61K39/125 , A61K39/135 , A61P31/14
Abstract: 本发明提供一种重组O型口蹄疫病毒表位基因的塞内卡重组病毒、重组疫苗及其制备方法和应用，涉及基因工程技术领域。本发明获得SVV/FJ/001株全长cDNA，并对其5'UTR进行缺失及突变改造，同时在SVA cDNA中融合进串联的O型FMDV的重组表位基因，构建得到重组口蹄疫抗原表位的塞内卡重组病毒，该重组病毒能够表达融合进的口蹄疫B细胞表位和T细胞表位，且表达产物具有良好的反应原性，重组病毒的致病性显著降低甚至对猪无致病性，显著提高了毒株的生物安全性；制备的灭活疫苗具有良好的免疫原性，在有效激发SVA中和抗体的同时还能产生针对FMDV的特异性抗体，可用于塞内卡病毒及一种或多种非塞内卡病毒的防控。
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公开(公告)号：CN108103078B
公开(公告)日：2019-02-19
申请号：CN201810003888.2
申请日：2018-01-03
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N15/41 , C12N7/00 , A61K39/125 , A61P31/14 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及一种分离的塞尼卡谷病毒核酸、一种塞尼卡谷病毒株、一种包含所述塞尼卡谷病毒株的塞尼卡谷病毒疫苗及其制备方法，以及所述塞尼卡谷病毒疫苗在制备用于预防和/或控制动物塞尼卡谷病毒引起的相关疾病的药物中的用途。
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公开(公告)号：CN108384893A
公开(公告)日：2018-08-10
申请号：CN201810415406.4
申请日：2018-05-03
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种用于检测口蹄疫病毒和塞尼卡谷病毒的实时荧光定量RT-PCR试剂盒及其应用。所述试剂盒包含分别用于检测口蹄疫病毒和塞尼卡谷病毒的引物以及探针，优选的，所述试剂盒中还包含核酸提取液、2×Direct qRT-PCR Mix、酶混合液、阴性对照、阳性对照。使用本发明的试剂盒检测口蹄疫病毒和塞尼卡谷病毒，具有特异性高，灵敏度高，稳定性好，操作简便等优点，用户无需额外提取病毒RNA，无需反转录，只需将待检样品加入反应管中，利用荧光信号的变化，通过Ct值和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析，即可计算待检样品拷贝数。不仅适用于科研单位定量分析，而且适合于各级防控单位，基层兽医站，大中型养殖场等的病原检测分析，具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN101948811B
公开(公告)日：2013-01-09
申请号：CN201010256781.2
申请日：2010-08-18
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明涉及利用反向遗传操作拓展口蹄疫疫苗株抗原谱及疫苗制备方法。本发明的口蹄疫病毒毒株，其VP3和VP1结构蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：4中第304-736位氨基酸残基所示。实验证明，将本发明得到的突变病毒株制成疫苗，可以同时抗中国型O/TL/Taiwan/97谱系猪源流行毒、泛亚型O/China/99谱系猪源流行毒和东南亚型缅甸98谱系O/GS/2010猪源流行毒的侵害，具有抗原普广的特性，免疫猪，能明显提高对抗原性有差异的同型口蹄疫病毒攻击的保护率，达到交叉保护的免疫效果，在预防和控制口蹄疫中将发挥重要作用。
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公开(公告)号：CN120082525A
公开(公告)日：2025-06-03
申请号：CN202510187899.0
申请日：2025-02-20
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)
Abstract: 本发明提供了一种L蛋白突变的口蹄疫病毒重组毒株及其构建方法和应用，属于生物技术技术领域。一种L蛋白突变的口蹄疫病毒重组毒株，其中L蛋白是第18位、28位和39位氨基酸发生突变或缺失的突变L蛋白。本发明证明宿主蛋白POLR2H过表达抑制FMDV的复制，并且是通过蛋白酶体通路降解L蛋白，进而抑制病毒复制；本发明通过在FMDV L蛋白中对关键氨基酸位点(18、28和39位)进行突变，构建了不被宿主蛋白POLR2H抑制复制的口蹄疫病毒重组毒株，所述重组病毒能够稳定传代，且在BHK‑21细胞上具有高病毒滴度的特性，提高了病毒滴度及抗原产量，能够用于FMDV疫苗制备，具备良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN119979607A
公开(公告)日：2025-05-13
申请号：CN202510190001.5
申请日：2025-02-20
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)
Abstract: 本发明提供了一种稳定传代的重组口蹄疫病毒毒株及构建方法和应用，属于生物医药技术领域。本发明根据宿主细胞KRT31蛋白对FMDV的复制抑制性，通过在L蛋白中引入点突变，消除KRT31蛋白降解L蛋白及抑制FMDV复制的能力。本发明成功构建并拯救了L蛋白关键氨基酸位点突变的重组口蹄疫病毒株，突变位点能稳定遗传，且不影响口蹄疫病毒的复制，提高了病毒滴度，具有良好的生产性能，可用于制备重组口蹄疫疫苗株。
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