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公开(公告)号：CN104531705A
公开(公告)日：2015-04-22
申请号：CN201410751563.4
申请日：2014-12-09
Applicant: 中国农业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/66 , C12N15/89 , A01K67/027
Abstract: 本发明提供了一种利用CRISPR-Cas9系统敲除动物myostatin基因的方法。本发明首先获得针对myostatin第二外显子的sgRNA识别区的DNA序列，其碱基序列如SEQ ID NO.1所示；接着构建myostatin第二外显子的sgRNA表达结构，并将T7启动子插入sgRNA转录起始位点前，同时构建Cas9蛋白的体外转录载体，以T7启动子调控。利用Cas9和sgRNA的体外转录载体获得Cas9mRNA和sgRNA，可用于生产敲除myostatin基因的动物。
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公开(公告)号：CN104531704A
公开(公告)日：2015-04-22
申请号：CN201410751079.1
申请日：2014-12-09
Applicant: 中国农业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/66 , C12N15/89 , A01K67/027
Abstract: 本发明提供了一种利用CRISPR-Cas9系统敲除动物FGF5基因的方法。本发明首先获得针对FGF5第二外显子的sgRNA识别区的DNA序列，其碱基序列如SEQ ID NO.1所示；接着构建FGF5第二外显子的sgRNA表达结构，并将T7启动子插入sgRNA转录起始位点前，同时构建Cas9蛋白的体外转录载体，以T7启动子调控。利用Cas9和sgRNA的体外转录载体获得Cas9 mRNA和sgRNA，可用于生产敲除FGF5基因的动物。
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公开(公告)号：CN103757037A
公开(公告)日：2014-04-30
申请号：CN201310692299.7
申请日：2013-12-17
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明公开了一种诱导表达锌指核酸酶的载体及其应用。该载体含有ColE1ori、Ampr基因，以及四个表达盒；从上游到下游，表达盒1依次包括PCMV？IE、Puror和SV40polyA，表达盒2依次包括PCMV、rtTA-Advanced和SV40polyA，表达盒3依次包括TREmod、PminCMV、DNA片段1和SV40polyA，表达盒4依次包括TREmod、PminCMV、DNA片段2和SV40polyA。实验证明，本发明具有如下优点：本发明所提供载体中带有一个用于药物筛选的基因，在转染效率低的条件下便于筛选和富集阳性细胞；本发明所提供载体将两个ZFN质粒整合到一起，故只要转染单个质粒即可，简化了转染环节；采用可诱导表达ZFNs的方法，控制ZFNs的表达时机，降低ZFNs对细胞的毒性。
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Patent Agency Ranking
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公开(公告)号：CN107460162B
公开(公告)日：2021-06-01
申请号：CN201710790139.4
申请日：2017-09-05
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明公开了一种提高羔羊体外胚胎发育能力的方法。本发明提供了一种促进羔羊卵子体外成熟的方法，为将离体羔羊的卵母卵丘细胞复合体在添加成年羊卵泡液的促卵子成熟培养液中进行体外成熟培养，实现促进羔羊卵子体外成熟。本发明用添加成年羊卵泡液的促卵子成熟培养液来培养羔羊卵母细胞，卵子成熟后通过体外受精生产体外胚胎，可以显著提高羔羊胚胎的发育能力。该方法简单易行，材料来源方便。
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公开(公告)号：CN104531704B
公开(公告)日：2019-05-21
申请号：CN201410751079.1
申请日：2014-12-09
Applicant: 中国农业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/66 , C12N15/89 , A01K67/027
Abstract: 本发明提供了一种利用CRISPR‑Cas9系统敲除动物FGF5基因的方法。本发明首先获得针对FGF5第二外显子的sgRNA识别区的DNA序列，其碱基序列如SEQ ID NO.1所示；接着构建FGF5第二外显子的sgRNA表达结构，并将T7启动子插入sgRNA转录起始位点前，同时构建Cas9蛋白的体外转录载体，以T7启动子调控。利用Cas9和sgRNA的体外转录载体获得Cas9 mRNA和sgRNA，可用于生产敲除FGF5基因的动物。
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公开(公告)号：CN107460162A
公开(公告)日：2017-12-12
申请号：CN201710790139.4
申请日：2017-09-05
Applicant: 中国农业大学
CPC classification number: C12N5/0682 , C12N5/0604 , C12N2500/30 , C12N2500/84 , C12N2501/31 , C12N2517/10
Abstract: 本发明公开了一种提高羔羊体外胚胎发育能力的方法。本发明提供了一种促进羔羊卵子体外成熟的方法，为将离体羔羊的卵母卵丘细胞复合体在添加成年羊卵泡液的促卵子成熟培养液中进行体外成熟培养，实现促进羔羊卵子体外成熟。本发明用添加成年羊卵泡液的促卵子成熟培养液来培养羔羊卵母细胞，卵子成熟后通过体外受精生产体外胚胎，可以显著提高羔羊胚胎的发育能力。该方法简单易行，材料来源方便。
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公开(公告)号：CN103757037B
公开(公告)日：2016-04-27
申请号：CN201310692299.7
申请日：2013-12-17
Applicant: 中国农业大学
Abstract: 本发明公开了一种诱导表达锌指核酸酶的载体及其应用。该载体含有ColE1ori、Ampr基因，以及4个表达盒；从上游到下游，表达盒1依次包括PCMV IE、Puror和SV40polyA，表达盒2依次包括PCMV、rtTA-Advanced和SV40polyA，表达盒3依次包括TREmod、PminCMV、DNA片段1和SV40polyA，表达盒4依次包括TREmod、PminCMV、DNA片段2和SV40polyA。实验证明，本发明具有如下优点：本发明所提供载体中带有一个用于药物筛选的基因，在转染效率低的条件下便于筛选和富集阳性细胞；本发明所提供载体将两个ZFN质粒整合到一起，故只要转染单个质粒即可，简化了转染环节；采用可诱导表达ZFNs的方法，控制ZFNs的表达时机，降低ZFNs对细胞的毒性。
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