公开(公告)号：CN112852815A

公开(公告)日：2021-05-28

申请号：CN202110193785.9

申请日：2021-02-20

Applicant: 东南大学

Inventor： 柴人杰 ,  袁佳 ,  张莎莎 ,  程诚 ,  高下

IPC: C12N15/113 ,  C12Q1/686

Abstract: 本发明涉及内耳干细胞领域，具体的是Pcolce2调控内耳干细胞增殖分化方法及在毛细胞再生中的应用。Pcolce2调控内耳干细胞增殖分化方法，包括以下步骤：一、siRNA的选择；二、Lgr5+祖细胞的分离培养及Pcolce2基因敲除；三、Pcolce2基因敲除对Lgr5+祖细胞增殖/分化的影响；四、数据分析。本发明将从Pcolce2这个基因调控方面着手研究其对内耳毛细胞再生的作用。通过OC‑1细胞利用不同siRNA敲除Pcolce2基因，RT‑qPCR检测转染效果；分离培养Lgr5+内耳干细胞转染后检测增殖及分化，通过Lgr5+干细胞上进行成球分化实验表明Pcolce2基因敲低后，Lgr5+内耳干细胞的增殖显著降低，说明Pcolce2基因有促进内耳干细胞增殖的作用。

公开(公告)号：CN112813026A

公开(公告)日：2021-05-18

申请号：CN202110198446.X

申请日：2021-02-20

Applicant: 东南大学

Inventor： 柴人杰 ,  陈蔚 ,  张莎莎 ,  程诚 ,  高下

IPC: C12N5/0797 ,  C12N5/071 ,  C12N15/12 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了一种Serpine2基因小鼠模型构建方法与应用，属于生物技术领域。一种Serpine2基因小鼠模型构建方法，包括以下步骤：培养初代OC细胞；通过siRNA敲减所述OC细胞中的Serpine2基因；取新生Lgr5‑EGFP小鼠耳蜗，放入培养液中培养，并消化成单细胞；从含有Lgr5‑EGFP细胞的单细胞悬液中分选出Lgr5+细胞；用所述siRNA敲除Lgr5+细胞中的Serpine2基因；培养Serpine2基因敲减的Lgr5+细胞，扫描电子显微镜观察并记录成球细胞的数量和直径；培养第一代所述成球细胞，用EdU染色以及DAPI、Myo7a抗体标记染色，观察毛细胞分化的情况。

公开(公告)号：CN116042805A

公开(公告)日：2023-05-02

申请号：CN202211428275.6

申请日：2022-11-15

Applicant: 东南大学

Inventor： 柴人杰 ,  艾静如 ,  张莎莎

IPC: C12Q1/6883 ,  C12N15/113 ,  A61K31/7088 ,  A61K47/46 ,  A61P27/16

Abstract: 本发明公开外泌体miRNA作为顺铂耳毒性生物标志物及其靶向治疗中的应用，属于生物技术领域，本发明利用体外构建小鼠顺铂耳毒性模型进行研究，在无菌环境下解剖产后3天的新生小鼠耳蜗基底膜，在皿孔皿中进行培养过夜，在实验组中加入50uM顺铂进行培养48小时，而对照组中加入等量的磷酸缓冲液进行同样的培养，收集的培养上清利用梯度离心的方法分离外泌体。解析了小鼠顺铂耳毒性模型下组织分泌外泌体中的mi RNA谱，并发现了实验组外泌体即顺铂耳毒性下分泌外泌体中携带10特异性mi RNA，其可作为特异性的生物标志物用于小鼠顺铂耳毒性的诊断，从新的方面就解析了小鼠在顺铂耳毒性模型下的特异性分子信息。

公开(公告)号：CN113273545B

公开(公告)日：2022-08-16

申请号：CN202110194377.5

申请日：2021-02-20

Applicant: 东南大学

Inventor： 柴人杰 ,  陈蔚 ,  张莎莎 ,  程诚 ,  高下

IPC: C12N15/12

Abstract: 本发明公开了一种GPA、Espin、Ikzf2小鼠模型的构建方法，属于生物技术领域。一种GPA、Espin、Ikzf2小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：生成Lgr5‑CreER阳性、GPA阳性且tdTomato阳性小鼠，使GPA在表达Lgr5的耳蜗支持细胞中特异性表达，在小鼠鼠龄到达3天和4天时，给小鼠注射他莫昔芬，在鼠龄10天时解剖耳蜗；对Myo7a阳性、tdTomato阳性细胞进行标记，并统计其数量；鉴定小鼠耳蜗中的毛细胞生成情况。

公开(公告)号：CN113273545A

公开(公告)日：2021-08-20

申请号：CN202110194377.5

申请日：2021-02-20

Applicant: 东南大学

Inventor： 柴人杰 ,  陈蔚 ,  张莎莎 ,  程诚 ,  高下

IPC: A01K67/027 ,  C12N15/85 ,  C12N15/12

Abstract: 本发明公开了一种GPA、Espin、Ikzf2小鼠模型的构建方法，属于生物技术领域。一种GPA、Espin、Ikzf2小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：生成Lgr5‑CreER阳性、GPA阳性且tdTomato阳性小鼠，使GPA在表达Lgr5的耳蜗支持细胞中特异性表达，在小鼠鼠龄到达3天和4天时，给小鼠注射他莫昔芬，在鼠龄10天时解剖耳蜗；对Myo7a阳性、tdTomato阳性细胞进行标记，并统计其数量；鉴定小鼠耳蜗中的毛细胞生成情况。

公开(公告)号：CN112899278A

公开(公告)日：2021-06-04

申请号：CN202110194253.7

申请日：2021-02-20

Applicant: 东南大学

Inventor： 柴人杰 ,  张盼盼 ,  张莎莎 ,  程诚 ,  高下

IPC: C12N15/113 ,  C12Q1/686

Abstract: 本发明涉及生物技术领域，具体的是Rps14和Foxg1调控内耳干细胞增殖分化方法及其应用，方法包括：一、Rps14基因对Lgr5+内耳干细胞增殖和分化的调控：1、OC‑1细胞培养；2、siRNA敲除Rps14基因；3、Lgr5+祖细胞的分离培养及Rps14基因敲除；4、Rps14基因敲除的Lgr5+祖细胞生物学效应，二、敲除Lgr5+祖细胞Foxg1对毛细胞增殖的影响。本发明将Lgr5‑EGFP‑CreERT2小鼠与Foxg1‑floxp小鼠杂交，在Lgr5+祖细胞中有条件地敲除Foxg1，发现Lgr5+祖细胞中敲除Foxg1能诱导新生小鼠耳蜗产生额外的IHCs。通过OC‑1细胞利用不同siRNA敲除Rps14基因，RT‑qPCR检测转染效果；分离培养Lgr5+内耳干细胞转染后检测增殖及分化，通过Lgr5+干细胞上进行成球分化实验表明敲减Rps14基因会抑制干细胞的增殖，对分化无影响。