公开(公告)号：CN104140944A

公开(公告)日：2014-11-12

申请号：CN201410373906.8

申请日：2014-07-31

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 周培 ,  冯海玮 ,  孙玉静 ,  支月娥 ,  唐冬 ,  卫星 ,  罗艳青 ,  毛亮

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N9/06 ,  C12R1/19 ,  C12R1/465

CPC classification number: Y02A40/12

Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域的硝酸盐还原酶的工程菌及其实现方法，以灰略红链霉菌基因组DNA为模板，与含有酶切位点的引物进行PCR扩增依次得到编码硝酸盐还原酶催化亚基及电子转移亚基的核苷酸序列；然后将扩增得到的基因序列依次连接到共表达载体pETDuet‐1，最终获得重组共表达载体pETDuet‐NB‐NA；之后将该硝酸盐还原酶表达载体转化到大肠杆菌表达菌株。本发明针对现有技术存在的由于硝酸盐还原酶在生物体内多为胞内酶且表达量较低导致的应用范围和效果严重受限等不足，应用基因工程手段实现硝酸盐还原酶体外的大量表达合成，对于次生盐渍化土壤的快速修复乃至实现精准农业具有重大意义。

公开(公告)号：CN103468618B

公开(公告)日：2015-04-01

申请号：CN201310439733.0

申请日：2013-09-25

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 周培 ,  冯海玮 ,  支月娥 ,  卫星 ,  罗艳青 ,  毛亮

IPC: C12N1/20 ,  C05F17/00 ,  C05F11/08 ,  C12R1/01

CPC classification number: Y02W30/43

Abstract: 一种生物环保技术领域的具有解磷能力的纤维素降解细菌及其应用，该纤维素降解细菌JSD-12为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)，保藏编号为CGMCC No.7923，保藏日期为2013年7月15日。该细菌不仅对纤维素具有较强的降解能力，同时还对秸秆中半纤维素和果胶组分有一定的分解能力；该细菌繁殖迅速并且可耐受60℃以上的高温，可制成高温堆肥的添加菌剂；此外该菌还具有解磷能力，可供生产菌肥。

公开(公告)号：CN104140945A

公开(公告)日：2014-11-12

申请号：CN201410374683.7

申请日：2014-07-31

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 周培 ,  冯海玮 ,  孙玉静 ,  毛亮 ,  支月娥 ,  唐冬 ,  卫星 ,  罗艳青

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12P13/14 ,  C12R1/19 ,  C12R1/465

Abstract: 一种基因工程技术领域的基于谷氨酰胺合成酶的工程菌及其实现方法，以灰略红链霉菌基因组DNA为模板，与含有酶切位点的引物进行PCR扩增得到谷氨酰胺合成酶编码基因；然后将该基因插入大肠杆菌表达载体pET‐22b(+)中得到含有谷氨酰胺合成酶编码基因的重组表达载体；再将重组表达载体导入大肠杆菌表达菌株，筛选得到谷氨酰胺合成酶的工程菌。本发明针对现有技术存在的由于谷氨酰胺合成酶在生物体内多为胞内酶且表达量较低导致的应用范围和效果严重受限等不足，应用基因工程手段实现其体外的大量表达合成。

公开(公告)号：CN103614404A

公开(公告)日：2014-03-05

申请号：CN201310571824.X

申请日：2013-11-13

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 周培 ,  冯海玮 ,  时唯伟 ,  支月娥 ,  刘群录 ,  陆伟 ,  初少华 ,  孙玉静 ,  卫星

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/66 ,  C12N1/21 ,  B09C1/10 ,  C12R1/11

Abstract: 一种基因工程技术领域的巨大芽孢杆菌亚硝酸盐还原酶共表达载体及其构建方法，首先测定巨大芽孢杆菌全基因组序列作为模板，根据设计出的PCR引物扩增出含有酶切位点亚硝酸盐还原酶大亚基(Bm-Nas D)和小亚基(Bm-Nas E)的基因序列，并依次连接到共表达载体pETDuet-1上，通过菌落PCR技术挑选含有目的基因片段的大肠杆菌DH5α的阳性克隆。本发明克服现有技术中由于亚硝酸盐还原酶小亚基基因序列在天然的巨大芽孢杆菌中表达量非常低，严重限制使用效果，实现极大的提高该基因的表达量。

公开(公告)号：CN103602690A

公开(公告)日：2014-02-26

申请号：CN201310565484.X

申请日：2013-11-13

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 周培 ,  冯海玮 ,  支月娥 ,  刘群录 ,  陆伟 ,  时唯伟 ,  孙玉静 ,  卫星 ,  初少华

IPC: C12N15/53 ,  C12N15/70 ,  C12N9/06 ,  C12R1/11

Abstract: 一种基因工程技术领域的基于巨大芽孢杆菌的亚硝酸盐还原酶小亚基外源表达方法，通过将测序得到的亚硝酸盐还原酶大亚基的基因序列通过引物序列扩增并连接到大肠杆菌表达载体中，从而获得重组表达载体，并进一步将重组表达载体导入大肠杆菌中，筛选到含有目的基因的转基因重组菌。本发明克服现有技术中由于亚硝酸盐还原酶小亚基基因序列在天然的巨大芽孢杆菌中表达量非常低，严重限制使用效果，应用基因工程菌表达本发明所述的亚硝酸盐还原酶小亚基基因序列，实现极大的提高该基因的表达量。

公开(公告)号：CN103589739A

公开(公告)日：2014-02-19

申请号：CN201310566617.5

申请日：2013-11-13

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 周培 ,  冯海玮 ,  孙玉静 ,  支月娥 ,  刘群录 ,  陆伟 ,  时唯伟 ,  卫星 ,  初少华

IPC: C12N15/52 ,  C12N9/00 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19 ,  C12R1/11

Abstract: 一种基因工程技术领域的基于巨大芽孢杆菌的谷氨酰胺合成酶外源表达方法，将测序得到的谷氨酰胺合成酶基因序列通过引物序列扩增并连接到表达载体中得到重组表达载体，并进一步将重组表达载体导入大肠杆菌中，筛选到含有目的基因的转基因重组菌。本发明克服现有技术中由于谷氨酰胺合成酶基因序列在天然的巨大芽孢杆菌中表达量非常低，严重限制使用效果，应用基因工程菌表达本发明所述的谷氨酰胺合成酶基因序列，实现极大的提高该基因的表达量。