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公开(公告)号：CN113151213A
公开(公告)日：2021-07-23
申请号：CN202110484455.5
申请日：2021-04-30
Applicant: 上海交通大学 , 中国大洋矿产资源研究开发协会(中国大洋事务管理局)
Abstract: 本发明提出了一种高忠实性DNA聚合酶及其制备方法和PCR应用，属于生物工程技术领域，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明DNA聚合酶来源于嗜热微生物Pyrococcus yayanosii，具有热稳定性高，扩增忠实性高，扩增能力强等特征。DNA聚合酶通过重组表达载体在大肠杆菌中诱导表达，经固定化镍离子亲和纯化和阳离子交换树脂纯化制备。
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公开(公告)号：CN113278642A
公开(公告)日：2021-08-20
申请号：CN202110481536.X
申请日：2021-04-30
Applicant: 上海交通大学 , 中国大洋矿产资源研究开发协会(中国大洋事务管理局)
IPC: C12N15/70 , C12N15/31 , C12P21/02 , C07K14/195 , C07K1/14 , C07K1/22 , C12Q1/686 , C12Q1/6844 , C12R1/19
Abstract: 本发明提出了一种深海古菌单链DNA结合蛋白SSB及其制备方法和应用，属于基因工程技术领域，包括以下步骤：S1.构建深海古菌单链DNA结合蛋白SSB的重组表达质粒S2.重组表达深海古菌单链DNA结合蛋白SSB；S3.亲和纯化深海古菌单链DNA结合蛋白SSB；S4.凝胶电泳实验检测深海古菌单链DNA结合蛋白SSB的单链DNA结合活性。本发明采用基因合成一种深海古菌单链DNA结合蛋白SSB，应用于DNA延伸与PCR反应，提高PCR特异性，减弱引物二聚体的生成，提高PCR目的基因的扩增效果，能提高PCR扩增产量1‑2倍。
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公开(公告)号：CN112877308A
公开(公告)日：2021-06-01
申请号：CN202110225737.3
申请日：2021-03-01
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明提出了一种具有反转录酶活性的DNA聚合酶I大片段及其编码基因、制备方法和应用，所述DNA聚合酶来源于光合藻类，属于I型DNA聚合酶，其具有很高的DNA聚合酶和外切酶活性，同时具有一定的反转录酶活性。本发明具有反转录酶活性的DNA聚合酶I大片段可以用于延伸DNA，制备DNA，同时可以用于以RNA为模板连，利用其反转录酶活性，合成互补的DNA链(cDNA)。将其克隆到pET28表达载体，通过重组表达载体在大肠杆菌中诱导表达，经固定化镍离子亲和纯化，制备DNA聚合酶。将其用于反转录反应，合成cDNA，用于RNA检测与cDNA编码基因的克隆。
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公开(公告)号：CN112029744A
公开(公告)日：2020-12-04
申请号：CN202010867696.3
申请日：2020-08-26
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明提供了一种DNA聚合酶及其编码基因、制备方法和PCR应用，所述DNA聚合酶来源于嗜热微生物Thermococcus eurythermalis，具有热稳定性高、扩增能力强，DNA扩增产量高，扩增忠实性高等特征，可应用于PCR扩增目的DNA。DNA聚合酶通过重组表达载体在大肠杆菌中诱导表达，经固定化镍离子亲和纯化和阳离子交换树脂纯化制备。该聚合酶的PCR反应缓冲液组成为50mM Tris-HCl(pH8.0)，2mM MgCl2，50mM KCl，2mM(NH4)2SO4，0.01％Triton X-100和0.005％BSA。可用于扩增长达6kb的目的DNA片段。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101067133B
公开(公告)日：2011-05-04
申请号：CN200710039383.3
申请日：2007-04-12
Applicant: 上海交通大学
IPC: C12N15/10
Abstract: 本发明涉及一种基于硫代修饰的连接酶非依赖性基因克隆方法，其中扩增目标基因与质粒载体的引物的5’端第11-21位间的某一磷酸二酯键为硫代修饰；目标基因的正向引物和载体的反向引物，目标基因的反向引物和载体的正向引物，每对引物5’端至硫代修饰上游第2位的连续碱基序列互补配对。PCR扩增目标基因与质粒载体后，纯化PCR产物。5’外切核酸酶从5’端降解DNA链，硫代修饰与5’外切核酸酶消化DNA双链的共同作用会生成长10-20个核苷酸的3’单链突出端。由于目标基因与质粒载体的3’突出端碱基序列互补，形成稳定的完全配对双链，不需要进行DNA连接反应，直接转化大肠杆菌。本发明目标基因克隆不依赖于限制性核酸内切酶与DNA连接酶，操作通量大，可用于大规模基因克隆。
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公开(公告)号：CN101168769A
公开(公告)日：2008-04-30
申请号：CN200710047954.8
申请日：2007-11-08
Applicant: 上海交通大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明涉及一种基于dU或dI寡核苷酸探针的单核苷酸多态性检测方法。dU或dI寡核苷酸探针序列特征是：全长30－40个核苷酸，5’端第15－25位的一个核苷酸与待检SNP位点配对，3’端第1－15位的一个核苷酸为dU或dI，dU或dI距离待检SNP位点5－15个核苷酸，整条寡核苷酸探针与待检SNP位点及其两侧核苷酸配对。反应组份包括dU或dI寡核苷酸探针，待测单链DNA，热稳定性mutS蛋白，报告DNA模板分子、报告DNA特异性的引物，dNTPs，pfuDNA聚合酶及其反应缓冲液。dU或dI寡核苷酸探针与待测单链DNA杂交后，若SNP位点处形成错配碱基，则PCR可扩增出报告DNA，若SNP位点处形成正确配对碱基，则不能扩增出报告DNA。根据报告DNA扩增结果，可推定待测SNP位点碱基种类。
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公开(公告)号：CN1187457C
公开(公告)日：2005-02-02
申请号：CN02136710.8
申请日：2002-08-29
Applicant: 上海交通大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 一种利用条形码式基因芯片检测待检核酸的方法，采用将特定碱基序列的寡核苷酸片段以微阵列形式固定于基片表面，制备条形码式基因芯片。待检单核苷酸位点特异性的正向引物上游序列与条形码互补配对，中间是限制酶切位点，下游序列与目标序列配对，5’-末端是生物素或荧光基团标记，距离3’-末端上游1-4个核苷酸处引入一个不能与目标序列配对的核苷酸，经聚合酶链式反应、纯化、酶切，与条形码基因芯片杂交洗脱。本发明条形码碱基序列组成不依赖于待测目标核酸，检测片段长度在30个核苷酸以内，极大地降低了交叉杂交和错误杂交，通过改变引物中与待检单核苷酸位点处的目标序列配对的下游序列，使条形码基因芯片适合于各种样品的检测。
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公开(公告)号：CN1398987A
公开(公告)日：2003-02-26
申请号：CN02136710.8
申请日：2002-08-29
Applicant: 上海交通大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明涉及一种条形码式基因芯片制备方法，采用将特定碱基序列的寡核苷酸片段以微阵列形式固定于基片表面，制备条形码式基因芯片。待检单核苷酸位点特异性的正向引物上游序列与条形码互补配对，中间是限制酶切位点，下游序列与目标序列配对，5’－末端是生物素或荧光基团标记，距离3’－末端上游1－4个核苷酸处引入一个不能与目标序列配对的核苷酸，经聚合酶链式反应、纯化、酶切，与条形码基因芯片杂交洗脱。本发明条形码碱基序列组成不依赖于待测目标核酸，检测片段长度在30个核苷酸以内，极大地降低了交叉杂交和错误杂交，通过改变引物中与待检单核苷酸位点处的目标序列配对的下游序列，使条形码基因芯片适合于各种样品的检测。
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公开(公告)号：CN1358867A
公开(公告)日：2002-07-17
申请号：CN01139253.3
申请日：2001-12-27
Applicant: 上海交通大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 一种荧光共振能量转移寡核苷酸微阵列的核酸检测方法,将未进行荧光标记的待测核酸样品与寡核苷酸微阵列杂交、洗脱,使能够与寡核苷酸探针完全配对的核酸结合在基因芯片上,寡核苷酸微阵列上寡核苷酸片段的序列特征是5′－末端的序列与待测核酸样品目标区域的3′－序列配对,3′－末端的序列与目标区域的5′－序列配对,中间序列是寡聚胸腺核苷酸,两个末端分别用不同的荧光基团修饰,中间用生物素修饰,根据荧光供体基团的激发光波长与荧光受体基团的发射光波长,检测微阵列的荧光信号及其位置,确定待测核酸样品的结构特征及其含量。本发明可用于检测目标核酸的种类与数量、目标核酸的单核苷酸多态性、疾病的基因诊断等领域。
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