公开(公告)号：CN113151213A

公开(公告)日：2021-07-23

申请号：CN202110484455.5

申请日：2021-04-30

Applicant: 上海交通大学 ,  中国大洋矿产资源研究开发协会(中国大洋事务管理局)

Inventor： 刘喜朋 ,  翁妍 ,  王风平

IPC: C12N9/12 ,  C12N15/54 ,  C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12Q1/686 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提出了一种高忠实性DNA聚合酶及其制备方法和PCR应用，属于生物工程技术领域，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明DNA聚合酶来源于嗜热微生物Pyrococcus yayanosii，具有热稳定性高，扩增忠实性高，扩增能力强等特征。DNA聚合酶通过重组表达载体在大肠杆菌中诱导表达，经固定化镍离子亲和纯化和阳离子交换树脂纯化制备。

公开(公告)号：CN113151213B

公开(公告)日：2022-12-02

申请号：CN202110484455.5

申请日：2021-04-30

Applicant: 上海交通大学 ,  中国大洋矿产资源研究开发协会(中国大洋事务管理局)

Inventor： 刘喜朋 ,  翁妍 ,  王风平

IPC: C12N9/12 ,  C12N15/54 ,  C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12Q1/686 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提出了一种高忠实性DNA聚合酶及其制备方法和PCR应用，属于生物工程技术领域，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明DNA聚合酶来源于嗜热微生物Pyrococcus yayanosii，具有热稳定性高，扩增忠实性高，扩增能力强等特征。DNA聚合酶通过重组表达载体在大肠杆菌中诱导表达，经固定化镍离子亲和纯化和阳离子交换树脂纯化制备。

公开(公告)号：CN113278642A

公开(公告)日：2021-08-20

申请号：CN202110481536.X

申请日：2021-04-30

Applicant: 上海交通大学 ,  中国大洋矿产资源研究开发协会(中国大洋事务管理局)

Inventor： 刘喜朋 ,  翁妍 ,  王风平

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/31 ,  C12P21/02 ,  C07K14/195 ,  C07K1/14 ,  C07K1/22 ,  C12Q1/686 ,  C12Q1/6844 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提出了一种深海古菌单链DNA结合蛋白SSB及其制备方法和应用，属于基因工程技术领域，包括以下步骤：S1.构建深海古菌单链DNA结合蛋白SSB的重组表达质粒S2.重组表达深海古菌单链DNA结合蛋白SSB；S3.亲和纯化深海古菌单链DNA结合蛋白SSB；S4.凝胶电泳实验检测深海古菌单链DNA结合蛋白SSB的单链DNA结合活性。本发明采用基因合成一种深海古菌单链DNA结合蛋白SSB，应用于DNA延伸与PCR反应，提高PCR特异性，减弱引物二聚体的生成，提高PCR目的基因的扩增效果，能提高PCR扩增产量1‑2倍。

公开(公告)号：CN112877308B

公开(公告)日：2022-10-11

申请号：CN202110225737.3

申请日：2021-03-01

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 刘喜朋 ,  翁妍

IPC: C12N9/12 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提出了一种具有反转录酶活性的DNA聚合酶I大片段及其编码基因、制备方法和应用，所述DNA聚合酶来源于光合藻类，属于I型DNA聚合酶，其具有很高的DNA聚合酶和外切酶活性，同时具有一定的反转录酶活性。本发明具有反转录酶活性的DNA聚合酶I大片段可以用于延伸DNA，制备DNA，同时可以用于以RNA为模板连，利用其反转录酶活性，合成互补的DNA链(cDNA)。将其克隆到pET28表达载体，通过重组表达载体在大肠杆菌中诱导表达，经固定化镍离子亲和纯化，制备DNA聚合酶。将其用于反转录反应，合成cDNA，用于RNA检测与cDNA编码基因的克隆。

公开(公告)号：CN112725300A

公开(公告)日：2021-04-30

申请号：CN202110225794.1

申请日：2021-03-01

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 刘喜朋 ,  翁妍

IPC: C12N9/12 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12Q1/686 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提出了一种DNA聚合酶γ及其编码基因、制备方法和应用。所述DNA聚合酶γ来源于噬菌体。本发明DNA聚合酶γ具有DNA聚合酶和外切酶活性，且在钙离子存在下同样具有活性，可以用于延伸DNA，制备DNA，同时钙离子下活性可用于检测钙离子的存在。将DNA聚合酶γ克隆到pET‑sumo表达载体，利用sumo蛋白酶标签序列来提高DNA聚合酶γ的可溶性。通过重组表达载体在大肠杆菌中诱导表达，经固定化镍离子亲和纯化，最后蛋白酶切除sumo标签，制备DNA聚合酶γ。

公开(公告)号：CN112877308A

公开(公告)日：2021-06-01

申请号：CN202110225737.3

申请日：2021-03-01

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 刘喜朋 ,  翁妍

IPC: C12N9/12 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提出了一种具有反转录酶活性的DNA聚合酶I大片段及其编码基因、制备方法和应用，所述DNA聚合酶来源于光合藻类，属于I型DNA聚合酶，其具有很高的DNA聚合酶和外切酶活性，同时具有一定的反转录酶活性。本发明具有反转录酶活性的DNA聚合酶I大片段可以用于延伸DNA，制备DNA，同时可以用于以RNA为模板连，利用其反转录酶活性，合成互补的DNA链(cDNA)。将其克隆到pET28表达载体，通过重组表达载体在大肠杆菌中诱导表达，经固定化镍离子亲和纯化，制备DNA聚合酶。将其用于反转录反应，合成cDNA，用于RNA检测与cDNA编码基因的克隆。

公开(公告)号：CN112029744A

公开(公告)日：2020-12-04

申请号：CN202010867696.3

申请日：2020-08-26

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 刘喜朋 ,  翁妍

IPC: C12N9/12 ,  C12N15/54 ,  C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12P19/34 ,  C12Q1/686

Abstract: 本发明提供了一种DNA聚合酶及其编码基因、制备方法和PCR应用，所述DNA聚合酶来源于嗜热微生物Thermococcus eurythermalis，具有热稳定性高、扩增能力强，DNA扩增产量高，扩增忠实性高等特征，可应用于PCR扩增目的DNA。DNA聚合酶通过重组表达载体在大肠杆菌中诱导表达，经固定化镍离子亲和纯化和阳离子交换树脂纯化制备。该聚合酶的PCR反应缓冲液组成为50mM Tris-HCl(pH8.0)，2mM MgCl2，50mM KCl，2mM(NH4)2SO4，0.01％Triton X-100和0.005％BSA。可用于扩增长达6kb的目的DNA片段。