公开(公告)号：CN108102996A

公开(公告)日：2018-06-01

申请号：CN201810145993.X

申请日：2018-02-12

Applicant: 江南大学

Inventor： 吴敬 ,  宿玲恰 ,  李雨桐

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/56 ,  C12N15/75 ,  C12N9/24 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了一种在枯草芽孢杆菌中高效表达麦芽糖淀粉酶的方法，属于基因工程及发酵工程领域。本发明通过检索信号肽序列，用Bacillus subtilis 168基因组PCR出各信号肽，与目的基因麦芽糖淀粉酶及载体pHY300PLK进行重组构建，并转化至枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis CCTCC M 2016536，得到三株重组枯草芽孢杆菌。以重组枯草芽孢杆菌为菌种，发酵生产麦芽糖淀粉酶。并通过确定氮源、碳源、发酵条件等优化最佳摇瓶条件，提高重组酶酶活。本发明的优点在于确定了在枯草芽孢杆菌中能高效表达麦芽糖淀粉酶的信号肽，并用食品安全的枯草芽孢杆菌为表达宿主重组表达麦芽糖淀粉酶，对重组菌产酶进行了发酵优化，表达量较好，得到的发酵上清液酶活为396U/mL，并且发酵原料来源广泛，生产成本较低。

公开(公告)号：CN106754601A

公开(公告)日：2017-05-31

申请号：CN201611191646.8

申请日：2016-12-21

Applicant: 江南大学

Inventor： 吴敬 ,  宿玲恰 ,  于林港

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N9/10 ,  C12N9/24 ,  C12R1/19

CPC classification number: C12N9/16 ,  C12N9/1051 ,  C12N9/2402 ,  C12N15/70 ,  C12Y204/01007 ,  C12Y301/04003 ,  C12Y302/01028

Abstract: 本发明公开了一种应用磷脂酶C将胞内蛋白在胞外表达的方法，属于生物工程技术领域。本发明通过共表达磷脂酶C，使胞内定位蛋白以非特异渗漏的方式释放到细胞外，筛选获得高性能的磷脂酶C和目标蛋白胞外酶活较高的共表达重组菌。蔗糖磷酸化酶与磷脂酶C共表达的重组菌胞外蔗糖磷酸化酶的酶活为1445.1U·mL‑1，海藻糖酶与磷脂酶C共表达的重组菌胞外海藻糖酶的酶活为322.3U·mL‑1，可以实现胞内定位目标蛋白胞外表达，提高生产效率、简化后提取工艺，在食品、化妆品及医药行业有广泛的应用价值,国内外市场需求较大。

公开(公告)号：CN106754466A

公开(公告)日：2017-05-31

申请号：CN201611025858.9

申请日：2016-11-22

Applicant: 江南大学

Inventor： 吴敬 ,  张康 ,  宿玲恰 ,  黄燕

IPC: C12N1/20 ,  C12N1/21 ,  C12N9/10 ,  C12R1/125

CPC classification number: C12R1/125 ,  C07K14/32 ,  C12N9/1074 ,  C12N9/2417 ,  C12N9/54 ,  C12Y204/01019 ,  C12Y302/01001 ,  C12Y304/21062 ,  C12Y304/24

Abstract: 本发明公开了一种用于高效外源蛋白表达和高密度培养的枯草芽孢杆菌，属于生物工程技术领域。本发明采用筛选分离的方法从土壤中获得一株蛋白表达量高的枯草芽孢杆菌，并敲除其六个基因srfC、spoIIAC、amyE、nprE、aprE和bamA，得到B.subtilis WS5，保藏号为CCTCC M 2016536。以枯草芽孢杆菌WS5为表达宿主，构建β‑CGTase基因工程菌。对β‑CGTase基因工程菌进行3L发酵罐培养，在发酵过程中产生的泡沫明显减少，镜鉴未检测到芽孢的产生，培养过程中胞外淀粉酶和蛋白酶几乎没有，发酵培养70h时β‑CGTase酶活达到270U/ml，DCW达到70g/L。

公开(公告)号：CN103409475B

公开(公告)日：2017-03-08

申请号：CN201310302347.7

申请日：2013-07-18

Applicant: 江南大学

Inventor： 吴敬 ,  陈星奕 ,  宿玲恰 ,  陈坚

IPC: C12P13/04

Abstract: 本发明公开了一种酶法合成L-茶氨酸的方法，属于生物技术领域。本发明通过化学合成获得γ-谷氨酰转肽酶的基因，并以大肠杆菌为宿主菌构建一种过量表达γ-谷氨酰转肽酶的基因工程菌，以重组酶作用于不同浓度的谷氨酰胺和乙胺盐酸盐，在pH9.5～10.5、37～50℃条件下，可以高效产生茶氨酸。本方法有酶源制备方法简单、成本低，酶量大，茶氨酸生产方法简单、转化率高、产量高、时间短等优点，利于工业化放大生产。

公开(公告)号：CN103014079B

公开(公告)日：2016-08-24

申请号：CN201210581083.9

申请日：2012-12-28

Applicant: 江南大学

Inventor： 吴敬 ,  宿玲恰 ,  陈坚

IPC: C12P7/62

Abstract: 本发明公开了一种应用角质酶进行酯合成的方法，在酸与醇的反应体系中加入Thermobifida fusca角质酶，角质酶为来源于Thermobifida fusca，NCBI编号分别为AAZ54920和AAZ54921，所述反应体系为：反应溶剂为有机溶剂，加水量0.03?0.08%，加酶量为10?80U/mL。本发明的生产工艺，具有流程简单、转化率高、适用范围广等优势。

公开(公告)号：CN104745562A

公开(公告)日：2015-07-01

申请号：CN201510155100.6

申请日：2015-04-02

Applicant: 江南大学

Inventor： 吴敬 ,  宿玲恰 ,  吴世雄

IPC: C12N9/90 ,  C12N15/61 ,  C12N15/10 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P19/24 ,  C12P19/12

Abstract: 本发明公开了一种麦芽寡糖基海藻糖合成酶突变体的制备及其应用，属于基因工程和酶工程领域。本发明是将嗜酸热硫矿硫化叶菌Sulfolobus acidocaldarius ATCC 33909麦芽寡糖基海藻糖合成酶表面疏水区域相关的氨基酸残基进行取代。所得突变体实现了麦芽寡糖基海藻糖合成酶可溶性表达量不同程度的提高，突变体L96T、L96H、M106K、M106H、I520H、I520R、L96T/M106K麦芽寡糖基海藻糖合成酶可溶性表达量分别提高了169.37％、16.19％、145.32％、92.38％、7.14％、9.37％、203.97％。突变体可溶性表达的提高利于其工业化应用。

公开(公告)号：CN103146784A

公开(公告)日：2013-06-12

申请号：CN201310030254.3

申请日：2013-01-16

Applicant: 江南大学

Inventor： 吴敬 ,  闫鹏安 ,  宿玲恰 ,  陈坚

IPC: C12P19/26

Abstract: 本发明涉及一种利用嗜热子囊菌(Thermobifida fusca)内切β-1，4-葡聚糖酶Cel5A降解壳聚糖制备壳寡糖的方法。壳聚糖底物用醋酸溶液充分溶解，加入内切β-1，4-葡聚糖酶Cel5A，在50℃条件下进行酶解反应，反应结束后，100℃煮沸10分钟灭酶。将酶解液调pH至8.0，并离心去沉淀，上清液真空干燥，得到壳寡糖产品。本发明的优点是：反应条件温和，酶解效率高，产物中有效组分含量高，壳3～8糖的含量在77％以上。

公开(公告)号：CN101792729B

公开(公告)日：2012-05-30

申请号：CN200910260984.6

申请日：2009-12-18

Applicant: 江南大学

Inventor： 吴敬 ,  陈晟 ,  宿玲恰 ,  陈坚 ,  吴丹

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N9/16 ,  C12R1/19

Abstract: 一种高效分泌表达重组角质酶的基因工程菌及其构建方法，属于生物工程技术领域。该基因工程菌是携带2种重组质粒的大肠杆菌BL21(DE3)，所述重组质粒为携带α-溶血素(α-hlyA)途径中特有基因的质粒pSTV28及含有角质酶-hlyAs基因的质粒pET20b(+)。该基因工程菌的构建：包括构建两个关键重组质粒并分别转化大肠杆菌BL21(DE3)，获得高效分泌重组角质酶的基因工程菌。用所述的基因工程菌生产角质酶包括液体培养和诱导表达两个步骤。以嗜热单胞菌Thermobifida fusca WSH03-11角质酶Tfu_0883作为报告蛋白，摇瓶发酵表明角质酶胞外产量是306U/mL，为本研究室前期工作采用II型分泌途径产量的1.7倍，实现了角质酶的高效分泌表达。