公开(公告)号：CN108102996B

公开(公告)日：2020-11-06

申请号：CN201810145993.X

申请日：2018-02-12

Applicant: 江南大学

Inventor： 吴敬 ,  宿玲恰 ,  李雨桐

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/56 ,  C12N15/75 ,  C12N9/24 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了一种在枯草芽孢杆菌中高效表达麦芽糖淀粉酶的方法，属于基因工程及发酵工程领域。本发明通过检索信号肽序列，用Bacillus subtilis 168基因组PCR出各信号肽，与目的基因麦芽糖淀粉酶及载体pHY300PLK进行重组构建，并转化至枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis CCTCC M 2016536，得到三株重组枯草芽孢杆菌。以重组枯草芽孢杆菌为菌种，发酵生产麦芽糖淀粉酶。并通过确定氮源、碳源、发酵条件等优化最佳摇瓶条件，提高重组酶酶活。本发明的优点在于确定了在枯草芽孢杆菌中能高效表达麦芽糖淀粉酶的信号肽，并用食品安全的枯草芽孢杆菌为表达宿主重组表达麦芽糖淀粉酶，对重组菌产酶进行了发酵优化，表达量较好，得到的发酵上清液酶活为396U/mL，并且发酵原料来源广泛，生产成本较低。

公开(公告)号：CN108102996A

公开(公告)日：2018-06-01

申请号：CN201810145993.X

申请日：2018-02-12

Applicant: 江南大学

Inventor： 吴敬 ,  宿玲恰 ,  李雨桐

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/56 ,  C12N15/75 ,  C12N9/24 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了一种在枯草芽孢杆菌中高效表达麦芽糖淀粉酶的方法，属于基因工程及发酵工程领域。本发明通过检索信号肽序列，用Bacillus subtilis 168基因组PCR出各信号肽，与目的基因麦芽糖淀粉酶及载体pHY300PLK进行重组构建，并转化至枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis CCTCC M 2016536，得到三株重组枯草芽孢杆菌。以重组枯草芽孢杆菌为菌种，发酵生产麦芽糖淀粉酶。并通过确定氮源、碳源、发酵条件等优化最佳摇瓶条件，提高重组酶酶活。本发明的优点在于确定了在枯草芽孢杆菌中能高效表达麦芽糖淀粉酶的信号肽，并用食品安全的枯草芽孢杆菌为表达宿主重组表达麦芽糖淀粉酶，对重组菌产酶进行了发酵优化，表达量较好，得到的发酵上清液酶活为396U/mL，并且发酵原料来源广泛，生产成本较低。