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公开(公告)号：CN103173367A
公开(公告)日：2013-06-26
申请号：CN201310076829.5
申请日：2013-03-11
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种产热稳定性重组胰蛋白酶的酵母工程菌及其应用，属于遗传工程领域。本发明通过将体外扩增所得的胰蛋白酶基因融合前导短肽YVEF，并将其整合连接到毕赤酵母GS115（Pichia pastoris）染色体上，构建了一株高效分泌表达重组胰蛋白酶的价目工程菌，纯化后得到热稳定提高的重组胰蛋白酶，在40℃、50℃和60℃下，热稳定性分别比野生胰蛋白酶提高了1.77,2.6和31倍的重组胰蛋白酶，解决了胰蛋白酶热稳定性低的问题。应用该菌种生产胰蛋白酶，产量相对较高、工艺相对简单、所使用工程菌株遗传及应用背景清晰，便于工业化应用。
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公开(公告)号：CN103074292A
公开(公告)日：2013-05-01
申请号：CN201310023160.3
申请日：2013-01-22
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高产L-苯丙氨酸的重组谷氨酸棒杆菌及发酵生产L-苯丙氨酸(Phe)的方法，属于代谢工程领域。本发明在谷氨酸棒杆菌模式菌株ATCC13032中通过诱导表达3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖酸7-磷酸合成酶基因，抗反馈抑制的分支酸变位酶/预苯酸脱水酶基因，转酮醇酶基因及磷酸烯醇式丙酮酸合成酶基因四个基因，获得了一株高产L-Phe的谷氨酸棒状杆菌工程菌株C.glutamicum19AF/99TP。在C.glutamicum ATCC13032中过量表达L-Phe合成代谢途径的莽草酸代谢途径，分支酸代谢途径的关键酶基因使得L-Phe产量达到3.47g/L，结合表达中心代谢途径提高前体物质的两个酶基因L-Phe产量最高达到4.86g/L，而出发菌株ATCC13032作为对照菌株在整个发酵过程中检测不到L-Phe的积累。
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公开(公告)号：CN102851270A
公开(公告)日：2013-01-02
申请号：CN201210275348.2
申请日：2012-08-03
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种获得杂交链霉菌胰蛋白酶酶原及其及其在产活性链霉菌胰蛋白酶中的应用，通过将体外所得的胰蛋白酶酶原基因连接到毕赤酵母GS115（Pichia pastoris）染色体上，构建了一株高效分泌表达杂交胰蛋白酶酶原的基因工程菌，发酵3～4天后，可得到杂交胰蛋白酶酶原的表达(图3(A)，解决了基础研究中获得杂交灰色链霉菌胰蛋白酶酶原的问题。并且通过肠激酶切割活化得到具有活性的链霉菌胰蛋白酶，活化后酰胺酶活力可达到1.4U/ml(图3(B))。应用该菌种生产杂交胰蛋白酶酶原，产量高、工艺简单、便于基础研究中胰蛋白酶酶原晶体结构的研究和应用，并且提供了一种通过活化杂交胰蛋白酶酶原获得活性链霉菌胰蛋白酶的方法。
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公开(公告)号：CN102851269A
公开(公告)日：2013-01-02
申请号：CN201210274589.5
申请日：2012-08-03
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种利用重组基因工程菌获得链霉菌胰蛋白酶酶原的方法，本发明通过化学全合成胰蛋白酶酶原基因连接到毕赤酵母GS115（Pichia pastoris）染色体上，构建了一株高效分泌表达胰蛋白酶酶原的基因工程菌，发酵3～4天后，可得到链霉菌胰蛋白酶酶原的表达，解决了长期无法从野生灰色链霉菌中获得胰蛋白酶酶原的问题。应用该菌种生产胰蛋白酶酶原，产量高、工艺简单、便于基础中进行链霉菌晶体结构研究及其激活机理研究之用。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102382790A
公开(公告)日：2012-03-21
申请号：CN201110328753.1
申请日：2011-10-26
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高产过氧化氢酶的重组枯草芽孢杆菌及其构建方法和应用，属于遗传工程技术领域。本发明首次将CAT基因在野生型宿主菌中表达。出发菌株为野生型枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis WSHDZ-01)，由武汉中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为CCTCC NO：M206062。将其CAT基因katA利用表达载体pSTOP1622在野生菌株中进行表达，大幅度提高了CAT的产量，是原始菌株的4倍。在3L搅拌式反应器中培养，CAT活性可以提高4.19倍，达到39117U/mL。本发明为CAT的过量表达提供了方法，具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN118421586B
公开(公告)日：2025-05-16
申请号：CN202410614080.3
申请日：2024-05-17
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明涉及一种合成不同分子量透明质酸的透明质酸合酶突变体，属于生物酶工程技术领域。本发明的透明质酸合酶突变体是对氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的透明质酸合酶进行点突变或者复合突变，在此基础上筛选出的透明质酸合酶突变体能够合成不同分子量的透明质酸。本发明突变后的透明质酸合酶与突变前的透明质酸合酶相比，能够合成不同分子量的透明质酸，且所获得的透明质酸分子量范围在300KDa‑40000KDa，同时透明质酸的产量增加，具有很高的工业应用价值。
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公开(公告)号：CN119662591A
公开(公告)日：2025-03-21
申请号：CN202510084007.4
申请日：2025-01-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种肝素2‑O‑磺基转移酶高活性突变体的构建方法，属于生物技术领域。1、本发明在肝素2‑O‑磺基转移酶的N端融合促溶标签，并优化了促溶标签的编码序列，实现了肝素2‑O‑磺基转移酶的活性表达。本发明还对肝素2‑O‑磺基转移酶进行了突变，获得了具有高稳定性和催化活性的突变体；进一步地，对肝素2‑O‑磺基转移酶进行发酵条件优化，提高了表达量和酶活，增强了其工业生产中的应用潜力。
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公开(公告)号：CN118773031A
公开(公告)日：2024-10-15
申请号：CN202410842996.4
申请日：2024-06-27
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种一步合成高磺酸化度的硫酸软骨素的重组毕赤酵母菌及其应用，属于生物工程技术领域。本发明利用合成生物学的手段对硫酸软骨素合成过程进行分步表达优化，包括软骨素合成途径优化、提高C4ST提高表达量，强化PAPS胞内循环与再生。本发明首次在毕赤酵母实现了胞内高磺酸化硫酸软骨素的一步合成，实现了一步反应合成98％磺酸化度的硫酸软骨素。
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公开(公告)号：CN118006578A
公开(公告)日：2024-05-10
申请号：CN202410134070.X
申请日：2024-01-31
Applicant: 江南大学 , 华熙生物科技股份有限公司
Abstract: 本发明公开了一种酶活提高的软骨素4‑O‑硫酸转移酶突变体及其生产方法，属于生物技术领域。本发明首先通过对鼠源的软骨素4‑O‑硫酸转移酶进行N端截短、融合短肽、优化连接肽、5'UTR改造及过表达分子伴侣，胞外酶活达到了1346.2U/L，相比于出发菌提高了21.7倍，进一步通过定点突变将酶活提高到了38895.1U/L，是出发菌株的627.3倍，这是目前报道的最高水平，为工业化生产非动物源硫酸软骨素奠定了坚实的基础。
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