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公开(公告)号：CN104212830B
公开(公告)日：2016-09-07
申请号：CN201410447500.X
申请日：2014-09-03
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌自调控表达系统及其构建方法和应用，属于基因工程领域。本发明的表达系统包括一种木糖诱导表达核酸内切酶基因的枯草芽孢杆菌和一种组成型表达抗核酸内切酶基因的质粒表达载体。在含有诱导剂木糖存在的培养基中，只有含有稳定存在该表达载体的枯草芽孢杆菌才能正常生长。利用本发明表达系统分别表达了荧光蛋白基因(gfp)、透明质酸合成酶基因(hasA)和角蛋白酶基因(ker)，通过发酵培养，荧光强度、透明质酸含量和角蛋白酶活分别比利用抗生素维持的质粒提高21.8％、45％和30.2％。
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公开(公告)号：CN105820992A
公开(公告)日：2016-08-03
申请号：CN201610397531.8
申请日：2016-06-07
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/80 , C12Y305/01005
Abstract: 本发明公开了一种高效表达Fe3+依赖型食品级酸性脲酶的乳酸菌，属于生物工程技术领域。Ni依赖性脲酶因Ni而存在安全隐患，为非食品酶，而Fe是人体含量的必需微量元素,对人体有益。本发明利用食品级乳酸乳球菌表达系统成功NZ3900(pNZ8149)实现了Fe3+依赖型食品级酸性脲酶的食品级高效表达，酸性脲酶酶活达到3.3U/mL，以EC为底物时酶活达到了0.8U/mL，相对于原始菌株地衣芽孢杆菌，大大的提高了Fe3+依赖型食品级酸性脲酶的表达产量，为食品级酸性脲酶的工业化应用奠定了基础。
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公开(公告)号：CN105802954A
公开(公告)日：2016-07-27
申请号：CN201610214900.5
申请日：2016-04-07
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/10
CPC classification number: C12N15/1024 , C12Q2521/501 , C12Q2521/101 , C12Q2531/113
Abstract: 本发明公开了一种基于耐热DNA聚合酶和连接酶的体外快速无缝组装DNA的方法，属于基因工程技术领域。本发明在需要组装构建的目标片段两末端引入同源臂序列，采用热循环进行变性?退火?切割?连接的方式，实现快速体外DNA组装构建。在2h内一次可以实现2?6个片段的高效快速的无缝组装。此外，可通过在引物中引入兼并突变序列实现PCR扩增后获得含有不同突变区域的DNA片段，进而通过本组装方法实现对基因DNA的组装突变构建。本发明可用于常规的DNA重组构建，并实现高通量操作，特别适合于对酶基因和合成途径的体外高效进化改造上，引入丰富的组合突变多样性，进行快速定向进化和合成生物学操作。
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公开(公告)号：CN103571815B
公开(公告)日：2016-03-02
申请号：CN201310524588.6
申请日：2013-10-29
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高效制备食品级酸性脲酶的方法及其应用，属于生物工程技术领域。利用食品级乳酸乳球菌表达系统成功实现了酸性脲酶的高效表达制备方法及应用，酸性脲酶酶活达到10200U/L，纯化后酸性脲酶比酶活为325.6U/mg。纯化后的酶对氨基甲酸乙酯底物的比酶活达到243.4U/mg，在黄酒中加入本发明制备的酸性脲酶可高效降解尿素(2天降解率100%)和氨基甲酸乙酯（3天降解率72%）。本发明制备的重组酸性脲酶可以用于发酵食品中尿素和氨基甲酸乙酯的消除，可高效解决发酵食品中氨基甲酸乙酯的残留问题，本发明为实现食品级酸性脲酶的工业化生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN104830748A
公开(公告)日：2015-08-12
申请号：CN201510295531.2
申请日：2015-06-02
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种弱化hemB基因表达提高大肠杆菌合成5-氨基乙酰丙酸的方法，属于代谢工程和微生物发酵领域。本发明在使用载体pRSFDuet-1过量表达谷氨酰-tRNA还原酶，谷氨醛氨基转移酶和粪卟啉原III氧化酶以及使用载体pETDuet-1过量表达尿卟啉原III合酶的基础上，通过在基因组水平改造hemB基因的启动子进而调控其表达，考察其对ALA积累的影响。通过摇瓶发酵验证，目的产物ALA产量有明显提高，30h时ALA产量为2680mg/L。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104593354A
公开(公告)日：2015-05-06
申请号：CN201510019222.2
申请日：2015-01-14
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种基于体外组合组装快速定向进化DNA的方法，属于基因工程技术领域。本发明将目标基因分成多个片段并进行体外扩增，通过在引物中引入兼并突变序列实现PCR扩增后获得含有不同突变区域的DNA片段，进而通过体外快速组装将所有片段组合为含有不同突变位点的完整基因。本方法实现了基因的快速体外进化，操作简单，可用于调控序列如启动子、核糖体结合位点等基因的快速定向进化，特别适合于对酶基因的体外高效进化改造上，结合结构分析，确定突变区域，然后进行分段克隆，可在酶基因内部引入丰富的突变多样性，进行快速定向进化。
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公开(公告)号：CN104561158A
公开(公告)日：2015-04-29
申请号：CN201510017646.5
申请日：2015-01-13
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种添加Fe2+提高大肠杆菌工程菌合成5-氨基乙酰丙酸的方法，属于代谢工程和微生物发酵领域。本发明以已构建的合成5-氨基乙酰丙酸的大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)LADF-6为出发菌株，考察培养基中添加Fe2+对ALA合成的影响，通过发酵验证，目的产物ALA产量有明显提高，30h时ALA产量为2.25g/L。在此基础上，经过优化Fe2+的初始添加量并在3L发酵罐中放大培养，当添加10mg/L的Fe2+时，ALA产量为3.85g/L。
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公开(公告)号：CN104278005A
公开(公告)日：2015-01-14
申请号：CN201410555212.6
申请日：2014-10-17
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/2474 , C12P19/26 , C12Y302/01035
Abstract: 本发明公开了一种表达透明质酸酶的重组枯草芽孢杆菌，属于生物工程技术领域。本发明通过选取不同的枯草芽孢杆菌分泌信号肽，融合在透明质酸酶N端，同时在信号肽与透明质酸酶之间融合6个组氨酸序列，在组成型强启动子控制下，以无机盐培养基培养发酵，在30℃培养60h的最高酶活可达到17164U/ml。本发明通过采用食品级枯草芽孢杆菌表达系统成功实现了对水蛭透明质酸酶的分泌表达，为实现水蛭来源的透明质酸酶的工业化制备生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN103088041B
公开(公告)日：2015-01-07
申请号：CN201310034739.X
申请日：2013-01-29
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开一种可用于高效生产角质酶的角质酶基因及其应用，特别是一种人工的角质酶基因编码基因及其应用。将编码角质酶基因进行合成优化得到tfu，并在N端人为添加α-factor信号肽及kozark序列。本发明成功实现了人工的角质酶基因在酿酒酵母中的表达。另外，本发明结合重组菌株表达体系中启动子的优化，构建出具有产酶和性能都较好的工程菌，为后续角质酶的工业化生产奠定了一定的理论基础。
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