快速克隆细菌谷氨酰胺合成酶基因的方法

    公开(公告)号:CN102787127A

    公开(公告)日:2012-11-21

    申请号:CN201210184123.6

    申请日:2012-09-07

    Applicant: 上海大学

    Abstract: 本发明涉及一种快速克隆细菌谷氨酰胺合成酶(GS)基因的方法。该方法的主要内容包括:(1)针对细菌类群的GS基因序列设计嵌套式兼并引物;(2)使用嵌套引物中的外引物和内引物下游引物对土壤DNA进行第一轮扩增,扩增产物纯化后作为模版,用内引物上下游引物进行第二轮PCR扩增;(3)对第二轮扩增后的特异片段进行纯化,连接pMD18-T载体,转化大肠杆菌Top10,挑取正确的阳性克隆;(4)对阳性克隆的插入片段进行测序和序列分析,确定基因的正确性;(5)用大肠杆菌GS缺陷型ET6017的功能互补实验来验证所克隆基因的功能。本发明所描述的基因克隆方法具有很高的成功率和较好的准确性。

    用于分离和鉴定Ac/Ds转座子侧翼序列的特异性引物

    公开(公告)号:CN102649959A

    公开(公告)日:2012-08-29

    申请号:CN201210162980.6

    申请日:2012-05-24

    Applicant: 上海大学

    Abstract: 本发明涉及一种用于分离和鉴定Ac/Ds转座子侧翼序列的引物及方法。该引物为:a.用于分离Ac/Ds5’端侧翼序列的Ac末端特异性引物为SEQIDNO:1~SEQIDNO:7所示的碱基序列;b.用于分离Ac/Ds3’端侧翼序列的Ac末端特异性引物为SEQIDNO:8~SEQIDNO:14所示的碱基序列。本发明涉及一种用于鉴定区分Ac和Ds侧翼序列的特异性引物及方法,其特征在于该引物为:SEQIDNO:15~SEQIDNO:18所示的碱基序列。利用这些Ac特异性引物可以很好扩增获得基因组中的Ac或Ds的侧翼序列。这种检测方法操作简单,为大规模的获得Ac突变体的Ac侧翼序列和分离Ac插入突变体的基因的重要的技术手段。

    玉米基因Opaque1的分子标记及其应用

    公开(公告)号:CN101629210B

    公开(公告)日:2011-11-23

    申请号:CN200910053864.9

    申请日:2009-06-26

    Applicant: 上海大学

    Abstract: 本发明涉及一种玉米基因Opaque1的分子标记及其应用。该分子标记的扩增DNA片断IDPg21的特异性引物及碱基序列为:正向引物从5’端至3’端为:GGGCTTATCTCGCTCTCCA,反向引物从5’端至3’端为:GGTGCCGGGCATAGTCTAA;扩增DNA片断IDPg25的特异性引物及碱基序列为:正向引物从5’端至3’端为:CGCTTATTGATGAGCAGTCTG,反向引物从5’端至3’端为:GGATACTATACTCGATCGCAAT。利用本发明的两个分子标记能对玉米任何时期和任何组织的DNA进行基因型鉴定,检测杂交育种子代各单株中O1基因的存在与否以及杂合或纯合状态。这种检测方法的准确性高,操作简单,为利用O1基因的DNA分子标记辅助育种提供重要的技术手段。

    一种具有天冬酰胺合成酶功能的基因、其编码蛋白及其应用

    公开(公告)号:CN102121018A

    公开(公告)日:2011-07-13

    申请号:CN201010600051.X

    申请日:2010-12-22

    Applicant: 上海大学

    Abstract: 本发明涉及一种具有天冬酰胺合成酶功能的基因、其编码蛋白及其应用。该基因具有下列核苷酸序列之一:1.具有SEQIDNO1所示的碱基序列;2.与序列表中序列1所限定的核酸序列具有95%以上的同源性,且编码相同生物学功能蛋白质的DNA序列。本发明的基因具有合成天冬酰胺合成酶功能,能恢复酿酒酵母突变体合成天冬酰胺的能力,同时也预示了它在农作物氮高效利用方面的应用价值。

    钠磷转运体DvSPT2基因诱导型启动子、其克隆方法及其应用

    公开(公告)号:CN101302525A

    公开(公告)日:2008-11-12

    申请号:CN200810040039.0

    申请日:2008-07-01

    Applicant: 上海大学

    Abstract: 本发明涉及一种钠磷转运体DvSPT2基因诱导型启动子、其克隆方法及其应用。本发明通过对筛选盐藻基因组文库并对阳性克隆的测序,获得盐藻钠磷共转运通道2号基因(DvSPT2)的包含上游调控序列在内的启动子区。通过对启动子区的分析表明,其中含有多个可能参与多重逆境胁迫的顺式作用元件。通过对在逆境条件下下DvSPT2的受控表达模式的检测,证明了DvSPT2在这些逆境下受到了了明显的诱导,表明DvSPT2这个基因上游的启动子区和调控序列在盐藻逆境适应中扮演了重要的角色。作为一个逆境信号诱导的启动子,DvSPT2启动子区和上游调控序列,在基因工程的应用方面具有重要的价值。

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