一种人工设计质粒pM5500及其在DNAmarker制备中的应用

    公开(公告)号:CN111705071A

    公开(公告)日:2020-09-25

    申请号:CN202010547528.6

    申请日:2020-06-16

    Abstract: 本发明公开了一种人工设计质粒pM5500及其在DNA marker制备中的应用,所述质粒的长度为5500bp,序列为:SEQ ID NO:1,包含高拷贝复制起始点序列和氨苄青霉素抗性基因编码序列,以及各种人工设计组合的DNA片段。该质粒在有限长度内包含了12个同种限制性内切酶识别位点,通过单酶切可产生1500、1000、750、500、250和100bp六种适用于中等分子量DNA marker制备的DNA片段,且各种片段的质量比为3:2:3:1:1:1。该质粒结构紧凑稳定,拷贝数高,易于大规模制备,以其为基础开发的DNA maker可广泛应用于生物学研究及生物技术领域。

    一种噬菌体核酸酶及其制备和应用

    公开(公告)号:CN101851633B

    公开(公告)日:2012-11-07

    申请号:CN201010187255.5

    申请日:2010-05-31

    Abstract: 本发明公开了一种噬菌体核酸酶及其制备和应用。所述噬菌体核酸酶基因具有SEQ ID NO.2的序列。所述噬菌体核酸酶具有SEQ ID NO.1的序列。所述的噬菌体核酸酶的制备方法,包括如下步骤:1)通过重叠延伸PCR方法人工合成该噬菌体核酸酶基因;2)将步骤1)所得基因与表达载体连接,构建重组载体;3)用所述重组载体转化大肠杆菌感受态细胞,培养,表达;4)收集菌体,破碎,亲和纯化。上述核酸酶具有随机切刻和切割双链DNA的能力。本发明提供的方法能高效表达纯化获得该酶蛋白。

    一种噬菌体核酸酶及其制备和应用

    公开(公告)号:CN101851633A

    公开(公告)日:2010-10-06

    申请号:CN201010187255.5

    申请日:2010-05-31

    Abstract: 本发明公开了一种噬菌体核酸酶及其制备和应用。所述噬菌体核酸酶基因具有SEQ ID NO.2的序列。所述噬菌体核酸酶具有SEQ ID NO.1的序列。所述的噬菌体核酸酶的制备方法,包括如下步骤:1)通过重叠延伸PCR方法人工合成该噬菌体核酸酶基因;2)将步骤1)所得基因与表达载体连接,构建重组载体;3)用所述重组载体转化大肠杆菌感受态细胞,培养,表达;4)收集菌体,破碎,亲和纯化。上述核酸酶具有随机切刻和切割双链DNA的能力。本发明提供的方法能高效表达纯化获得该酶蛋白。

    小麦高分子量麦谷蛋白14亚基基因的核酸序列及其应用

    公开(公告)号:CN1382692A

    公开(公告)日:2002-12-04

    申请号:CN02114579.2

    申请日:2002-05-17

    Abstract: 本发明公开了一种小麦储藏蛋白HMW-GS 14基因的核酸序列和对应的蛋白序列,以及基于该序列通过生物技术方法改良小麦加工品质的应用。本发明涉及的HMW-GS 14基因是出现在中国优质面包小麦种子的一种储藏蛋白基因,该基因产可显著提高小麦的面筋弹性。根据该基因序列可以通过基于PCR分子标记方法进行定向育种,培育出新的优质小麦。根据该基因序列可以克隆该基因,构建该基因的各种表达载体,并通过基因枪、农杆菌介导、花粉管通道等转化方法将该基因导入小麦,以培育出加工品质优良的小麦品种及种质。

    一种DNA Marker制备的紧凑型质粒的构建方法及其应用

    公开(公告)号:CN116411001A

    公开(公告)日:2023-07-11

    申请号:CN202310387704.8

    申请日:2023-04-12

    Abstract: 本发明提供了一种用于DNAMarker制备的紧凑型质粒的构建方法,该构建方法为:在参考质粒P1中的筛选标记基因S1内找到或引入一个目标限制性内切酶X的切点Q1,在不改变筛选标记基因S1对应蛋白序列和复制起始点序列Ori的前提下,以Q1为锚定点,引入更多限制性内切酶X识别位点,设计出目标质粒P2序列;以P2序列为蓝本,通过化学合成及扩增拼接方法获得目标质粒P2,即紧凑型质粒pM4850。本发明还提供了所述质粒的应用,该质粒长度4850bp,核苷酸序列为SEQ ID NO:5,包含36个限制性内切酶BamHI切点,单酶切可获得12种特征片段,大小依次为700bp、600bp、500bp、400bp、300bp、250bp、200bp、150bp、100bp、75bp、50bp和25bp,各片段的相对质量比为7:6:5:4:3:2.5:6:3:3:3:3:3,可作为小片段DNAMarker应用于科学研究和生物技术领域。

    T7EI-like核酸酶反应缓冲体系、DNA错配检测方法及应用

    公开(公告)号:CN111748610A

    公开(公告)日:2020-10-09

    申请号:CN202010587867.7

    申请日:2020-06-24

    Abstract: 本发明公开了一种T7EI-like核酸酶反应缓冲体系、DNA错配检测方法及应用,涉及一种T7EI-like核酸酶的反应缓冲溶液配方,以及利用该缓冲体系增强该类核酸酶错配识别切割能力的应用。常规的反应缓冲体系中,T7EI-like核酸酶对插入缺失(InDel)导致的错配DNA具有较好的识别切割能力,而对单核苷酸多态性(SNP)导致的错配DNA的识别切割能力较差;本发明的反应缓冲体系中,T7EI-like核酸酶对两类错配DNA均有良好的识别切割能力。该反应缓冲体系的核心在于其特定的缓冲溶质配比、去垢剂浓度、二价金属离子及辅助蛋白配比。该发明可应用于基因编辑效率的检测、DNA样品中错误序列的消除、基因编辑个体的筛查、样本中InDel和SNP位点的检测筛选、将InDel和SNP位点转化为分子标记进行分子辅助育种。

    小麦高分子量麦谷蛋白14亚基基因的核酸序列及其应用

    公开(公告)号:CN1191359C

    公开(公告)日:2005-03-02

    申请号:CN02114579.2

    申请日:2002-05-17

    Abstract: 本发明公开了一种小麦储藏蛋白HMW-GS 14基因的核酸序列和对应的蛋白序列,以及基于该序列通过生物技术方法改良小麦加工品质的应用。本发明涉及的HMW-GS 14基因是出现在中国优质面包小麦种子的一种储藏蛋白基因,该基因产可显著提高小麦的面筋弹性。根据该基因序列可以通过基于PCR分子标记方法进行定向育种,培育出新的优质小麦。根据该基因序列可以克隆该基因,构建该基因的各种表达载体,并通过基因枪、农杆菌介导、花粉管通道等转化方法将该基因导入小麦,以培育出加工品质优良的小麦品种及种质。

    一种人工设计质粒pM5500及其在DNA marker制备中的应用

    公开(公告)号:CN111705071B

    公开(公告)日:2023-03-10

    申请号:CN202010547528.6

    申请日:2020-06-16

    Abstract: 本发明公开了一种人工设计质粒pM5500及其在DNA marker制备中的应用,所述质粒的长度为5500bp,序列为:SEQ ID NO:1,包含高拷贝复制起始点序列和氨苄青霉素抗性基因编码序列,以及各种人工设计组合的DNA片段。该质粒在有限长度内包含了12个同种限制性内切酶识别位点,通过单酶切可产生1500、1000、750、500、250和100bp六种适用于中等分子量DNA marker制备的DNA片段,且各种片段的质量比为3:2:3:1:1:1。该质粒结构紧凑稳定,拷贝数高,易于大规模制备,以其为基础开发的DNA maker可广泛应用于生物学研究及生物技术领域。

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