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公开(公告)号：CN106399138B
公开(公告)日：2019-11-12
申请号：CN201610807435.6
申请日：2016-09-07
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明提供一种马克斯克鲁维酵母重组工程菌及其在生产口服猪圆环病毒II型病毒样颗粒疫苗中的应用，该重组工程菌是通过马克斯克鲁维酵母表达载体表达猪圆环病毒II型衣壳蛋白，制备猪圆环病毒II型病毒样颗粒口服疫苗。本发明提供的马克斯克鲁维酵母重组表达载体的调控元件均来源于食品安全级的克鲁维酵母，具有无抗生素抗性基因和大肠杆菌序列特征。本发明还提供一种制备猪圆环病毒II型病毒样颗粒口服疫苗的方法，利用本发明提供的猪圆环病毒II型病毒样颗粒口服疫苗，能够减少和预防感染PCV2所引起相关性临床症状，具有免疫效果好、安全性高、培养操作简单，产量高、生产成本低以及可大规模放大生产等优点。
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公开(公告)号：CN109187774A
公开(公告)日：2019-01-11
申请号：CN201810713760.5
申请日：2018-07-03
Applicant: 复旦大学
IPC: G01N30/02
Abstract: 本发明的目的在于提供一种操作简单、灵敏度高、重复性和适用性高的PCV2病毒样颗粒检测方法，该方法包括如下步骤：步骤S1，稀释待测样品并进行过滤澄清或离心澄清；步骤S2，取蛋白含量已被确定的猪圆环病毒2型病毒样颗粒标准品进行系列稀释，并对稀释后的系列标准品进行HPLC检测，建立以浓度为横坐标、峰高为纵坐标的回归方程；步骤S3，对稀释后的待测样品进行HPLC检测得到对应的样品峰高；步骤S4，根据回归方程及样品峰高计算得到待测样品中的猪圆环病毒2型病毒样颗粒浓度，其中，步骤S2及步骤S3中的HPLC所采用的色谱柱为凝胶色谱柱，采用的检测器为紫外检测器，其检测波长为280nm。
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公开(公告)号：CN108611327A
公开(公告)日：2018-10-02
申请号：CN201810712312.3
申请日：2018-07-03
Applicant: 复旦大学
Abstract: 为解决猪圆环病毒2型病毒样颗粒的分离纯化中的步骤复杂、工艺繁琐、生产成本高、纯化效率低等问题，本发明提供了一种猪圆环病毒2型病毒样颗粒的分离纯化方法，包括如下步骤：步骤S1，收集重组酵母细胞并进行破碎，获得含猪圆环病毒2型病毒样颗粒的细胞裂解液；步骤S2，对细胞裂解液进行澄清获得病毒样颗粒初提液；步骤S3，对病毒样颗粒初提液进行离子交换层析获得病毒样颗粒粗纯液；步骤S4，对病毒样颗粒粗纯液进行超滤浓缩获得病毒样颗粒浓缩液；步骤S5，对病毒样颗粒浓缩液进行凝胶过滤层析纯化，获得纯化后的病毒样颗粒，其中，步骤S3的离子交换层析中，吸附过程及洗脱过程中所采用的缓冲液均含有预定浓度的表面活性剂。
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公开(公告)号：CN109187774B
公开(公告)日：2021-09-28
申请号：CN201810713760.5
申请日：2018-07-03
Applicant: 复旦大学
IPC: G01N30/02
Abstract: 本发明的目的在于提供一种操作简单、灵敏度高、重复性和适用性高的PCV2病毒样颗粒检测方法，该方法包括如下步骤：步骤S1，稀释待测样品并进行过滤澄清或离心澄清；步骤S2，取蛋白含量已被确定的猪圆环病毒2型病毒样颗粒标准品进行系列稀释，并对稀释后的系列标准品进行HPLC检测，建立以浓度为横坐标、峰高为纵坐标的回归方程；步骤S3，对稀释后的待测样品进行HPLC检测得到对应的样品峰高；步骤S4，根据回归方程及样品峰高计算得到待测样品中的猪圆环病毒2型病毒样颗粒浓度，其中，步骤S2及步骤S3中的HPLC所采用的色谱柱为凝胶色谱柱，采用的检测器为紫外检测器，其检测波长为280nm。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108864259A
公开(公告)日：2018-11-23
申请号：CN201810713720.0
申请日：2018-07-03
Applicant: 复旦大学
IPC: C07K14/01
Abstract: 本发明的目的在于提供一种操作简单、回收率高的猪圆环病毒2型病毒样颗粒的溶出方法，具体包括如下步骤：步骤S1，将表达猪圆环病毒2型病毒样颗粒的酵母细胞培养液离心，得到表达猪圆环病毒2型病毒样颗粒酵母菌的菌泥；步骤S2，加入破菌缓冲液重悬菌体，得到菌体悬液；步骤S3，菌体悬液经低温高压均质机破碎，得到含猪圆环病毒2型病毒样颗粒的破菌液；步骤S4，将破菌液离心，得到含猪圆环病毒2型病毒样颗粒蛋白的溶出液，其中，步骤S2中的破菌缓冲液为含有预定浓度的NaCl以及亲水性表面活性剂的磷酸盐缓冲液。
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公开(公告)号：CN108611327B
公开(公告)日：2022-03-18
申请号：CN201810712312.3
申请日：2018-07-03
Applicant: 复旦大学
Abstract: 为解决猪圆环病毒2型病毒样颗粒的分离纯化中的步骤复杂、工艺繁琐、生产成本高、纯化效率低等问题，本发明提供了一种猪圆环病毒2型病毒样颗粒的分离纯化方法，包括如下步骤：步骤S1，收集重组酵母细胞并进行破碎，获得含猪圆环病毒2型病毒样颗粒的细胞裂解液；步骤S2，对细胞裂解液进行澄清获得病毒样颗粒初提液；步骤S3，对病毒样颗粒初提液进行离子交换层析获得病毒样颗粒粗纯液；步骤S4，对病毒样颗粒粗纯液进行超滤浓缩获得病毒样颗粒浓缩液；步骤S5，对病毒样颗粒浓缩液进行凝胶过滤层析纯化，获得纯化后的病毒样颗粒，其中，步骤S3的离子交换层析中，吸附过程及洗脱过程中所采用的缓冲液均含有预定浓度的表面活性剂。
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公开(公告)号：CN106399350B
公开(公告)日：2020-02-21
申请号：CN201610806538.0
申请日：2016-09-07
Applicant: 复旦大学
IPC: C12N15/81 , C12N1/19 , C12N7/04 , A61K39/125 , A61P31/14
Abstract: 本发明提供了一种猪圆环病毒II型衣壳蛋白重组表达的马克斯克鲁维酵母工程菌，将猪圆环病毒II型衣壳蛋白基因克隆到表达载体中，并在马克斯克鲁维酵母中重组表达获得猪圆环病毒II型病毒样颗粒。本发明还提供了一种猪圆环病毒II型病毒样颗粒疫苗的制备方法，通过重组马克斯克鲁维酵母的高密度发酵，获得猪圆环病毒II型病毒样颗粒，经分离纯化制备疫苗。本发明提供的猪圆环病毒II型病毒样颗粒疫苗，注射免疫一次即可获得高水平血清IgG抗体，具有免疫效果好、安全性高、培养操作简单，产量高、生产成本低以及可大规模放大生产等优点，可应用于减少、预防感染猪圆环病毒PCV2所引起相关性临床症状。
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公开(公告)号：CN106399350A
公开(公告)日：2017-02-15
申请号：CN201610806538.0
申请日：2016-09-07
Applicant: 复旦大学
IPC: C12N15/81 , C12N1/19 , C12N7/04 , A61K39/125 , A61P31/14
Abstract: 本发明提供了一种猪圆环病毒II型衣壳蛋白重组表达的马克斯克鲁维酵母工程菌，将猪圆环病毒II型衣壳蛋白基因克隆到表达载体中，并在马克斯克鲁维酵母中重组表达获得猪圆环病毒II型病毒样颗粒。本发明还提供了一种猪圆环病毒II型病毒样颗粒疫苗的制备方法，通过重组马克斯克鲁维酵母的高密度发酵，获得猪圆环病毒II型病毒样颗粒，经分离纯化制备疫苗。本发明提供的猪圆环病毒II型病毒样颗粒疫苗，注射免疫一次即可获得高水平血清IgG抗体，具有免疫效果好、安全性高、培养操作简单，产量高、生产成本低以及可大规模放大生产等优点，可应用于减少、预防感染猪圆环病毒PCV2所引起相关性临床症状。
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公开(公告)号：CN106399138A
公开(公告)日：2017-02-15
申请号：CN201610807435.6
申请日：2016-09-07
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明提供一种马克斯克鲁维酵母重组工程菌及其在生产口服猪圆环病毒II型病毒样颗粒疫苗中的应用，该重组工程菌是通过马克斯克鲁维酵母表达载体表达猪圆环病毒II型衣壳蛋白，制备猪圆环病毒II型病毒样颗粒口服疫苗。本发明提供的马克斯克鲁维酵母重组表达载体的调控元件均来源于食品安全级的克鲁维酵母，具有无抗生素抗性基因和大肠杆菌序列特征。本发明还提供一种制备猪圆环病毒II型病毒样颗粒口服疫苗的方法，利用本发明提供的猪圆环病毒II型病毒样颗粒口服疫苗，能够减少和预防感染PCV2所引起相关性临床症状，具有免疫效果好、安全性高、培养操作简单，产量高、生产成本低以及可大规模放大生产等优点。
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