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公开(公告)号：CN112176020B
公开(公告)日：2024-08-20
申请号：CN202011076553.7
申请日：2020-10-10
Applicant: 吉林医药学院
Abstract: 本发明公开了一种钙激活氯离子通道激活剂的筛选方法，包括：分别构建ANO1和YFP‑H148Q/I152L的真核表达载体；将所述真核表达载体分别稳定转染入FRT细胞中，且使所述FRT细胞共表达ANO1和YFP‑H148Q/I152L两种蛋白后，经过多次有限稀释，获取FRT细胞克隆模型；将所述FRT细胞克隆模型传代到黑壁透明底的微孔板中，且使细胞密度为每孔20000个细胞，48h后细胞汇合度达到90％以上；向所述黑壁微孔板中分别加入待测试化合物和碘化钠PBS后测试所述YFP‑H148Q/I152L荧光蛋白的相对荧光强度，当所述相对荧光强度迅速下降时，所述待测试化合物为钙激活氯离子通道激活剂，持续检测相对荧光强度一直保持下降为直接作用于钙激活氯离子通道的激活剂。
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公开(公告)号：CN112359088A
公开(公告)日：2021-02-12
申请号：CN202011073297.6
申请日：2020-10-09
Applicant: 吉林医药学院
IPC: C12Q1/02 , C12N5/10 , C12N15/85 , C12N15/65 , A61K45/00 , A61P9/04 , A61P9/10 , A61P11/00 , A61P35/00 , A61P27/02 , A61P1/04 , A61P29/00 , A61P15/08
Abstract: 本发明涉及生物医药领域，特别涉及FRT细胞株及其在制备检测胞浆内钙离子浓度的制剂或试剂盒中的应用。本发明通过荧光淬灭动力学试验证实该细胞模型可筛选P2ry2调节剂，应用Fura‑2表明该细胞模型可敏感地检测胞浆内钙离子浓度的变化且Ca2+浓度与P2ry2调节剂及相对荧光强度呈剂量依赖关系；Z'因子为0.75，说明该细胞模型可以高通量筛选P2ry2的调节剂且有良好的稳定性与可重复性。
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公开(公告)号：CN112176020A
公开(公告)日：2021-01-05
申请号：CN202011076553.7
申请日：2020-10-10
Applicant: 吉林医药学院
Abstract: 本发明公开了一种钙激活氯离子通道激活剂的筛选方法，包括：分别构建ANO1和YFP‑H148Q/I152L的真核表达载体；将所述真核表达载体分别稳定转染入FRT细胞中，且使所述FRT细胞共表达ANO1和YFP‑H148Q/I152L两种蛋白后，经过多次有限稀释，获取FRT细胞克隆模型；将所述FRT细胞克隆模型传代到黑壁透明底的微孔板中，且使细胞密度为每孔20000个细胞，48h后细胞汇合度达到90％以上；向所述黑壁微孔板中分别加入待测试化合物和碘化钠PBS后测试所述YFP‑H148Q/I152L荧光蛋白的相对荧光强度，当所述相对荧光强度迅速下降时，所述待测试化合物为钙激活氯离子通道激活剂，持续检测相对荧光强度一直保持下降为直接作用于钙激活氯离子通道的激活剂。
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公开(公告)号：CN112322689A
公开(公告)日：2021-02-05
申请号：CN202011073285.3
申请日：2020-10-09
Applicant: 吉林医药学院
Abstract: 本发明涉及生物医药领域，特别涉及FRT细胞株在制备筛选组胺H2受体调节剂的制剂或试剂盒中的应用。FRT细胞在mRNA及蛋白质水平内源性表达H2。倒置荧光显微镜观察到FRT细胞膜和胞浆中均有绿色荧光，证实成功构建共表达CFTR和YFP‑H148Q/I152L细胞模型。荧光淬灭动力学实验证明该模型具有cAMP激活氯离子通道的特性，可用于调节剂的筛选；荧光斜率值与H2受体调节剂成剂量依赖曲线关系，可用于H2受体调节剂的筛选。Z'因子测得0.7，证明所建立的细胞模型可用于高通量筛选且有良好的稳定性。
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