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公开(公告)号：CN102373226A
公开(公告)日：2012-03-14
申请号：CN201010262922.1
申请日：2010-08-26
Applicant: 南京大学
IPC: C12N15/37 , C12N15/10 , C12N15/70 , C07K14/025
Abstract: 本发明用原核细胞表达系统表达了突变的HPV16 E7蛋白。首先克隆了突变的E7(mutantE7，mE7)基因，将第70位碱基由T变成G，并去除终止密码子前的15个碱基，分别构建了mE7的克隆载体TA-mE7和表达载体pET-28a(+)-mE7，并原核表达、分离纯化了mE7蛋白，与HPV16 E7蛋白相比较，第24位氨基酸残基由Cys转变为Gly，并且去除了C-末端5个氨基酸残基，包括94位的Cys，破坏了Cys-X-X-Cys的模序结构，从而大大降低了E7蛋白的转化活性。mE7蛋白免疫100％保护了小鼠不生成TC-1肿瘤。
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公开(公告)号：CN101886105A
公开(公告)日：2010-11-17
申请号：CN200910026562.2
申请日：2009-05-12
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明利用微型蛋白内含子制备胰高血糖素样肽-1。Ssp DnaB蛋白质内含子(intein)其N-末端的106个氨基酸(inteinN)和C-末端的48个氨基酸(intein C)，形成的Ssp DanB微型蛋白质内含子具有完整的剪接功能。将intein C与胰高血糖素样肽-1融合蛋白(inteinC-GLP)在大肠杆菌内进行表达，intein N在大肠杆菌中进行表达，并以Ni-Sepharose进行纯化。纯化后的inteinC-GLP与intein N在pH6.2的磷酸盐缓冲体系中进行拼接，释放出重组胰高血糖素样肽-1。拼接产物上样于Ni-Sepharose，GLP-1存在于穿过液中，其它蛋白被吸附于Ni-Sepharose柱上。将GLP-1粗品进一步浓缩纯化得到纯品，MALDI-TOF质谱分析，与理论分子量相符合。葡萄糖耐受实验结果证明，与对照相比GLP-1(7-36)能有效降低小鼠血糖水平。
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公开(公告)号：CN1706953A
公开(公告)日：2005-12-14
申请号：CN200410055553.3
申请日：2004-08-04
Applicant: 南京大学生物制药工程研究中心
Abstract: 本发明属于生物制药领域中应用基因工程技术生产蛋白质药物的范畴。本发明公开了一种新的具有快速溶栓效果的人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体蛋白K2tPA的制备方法和应用。其制备方法是用基因工程技术构建了表达K2tPA的重组质粒，并实现了在大肠杆菌中的高效表达。将含有人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体(K2tPA)重组表达质粒的工程菌经10L种子罐培养及100L发酵，每100L发酵液得重组人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体(K2tPA)纯品4g，纯度达95％以上，比活大于50万IU/mg，内毒素及热源含量、宿主蛋白残留量、宿主DNA残留量等均达到临床使用标准，可用于心、脑血管疾病的血栓形成的治疗。
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公开(公告)号：CN1220699C
公开(公告)日：2005-09-28
申请号：CN01108179.1
申请日：2001-04-04
Applicant: 南京大学分子医学研究所 , 南京兰鼎科学技术有限公司
Abstract: 本发明属于生物技术制药中的基因工程生产多肽药物及化学合成多肽药物的技术领域，其目的是利用(1)化学合成HSIFTPETNPRAGLEK多肽，(2)化学合成该多肽的基因，并实现在大肠杆菌中的高效表达，经分离纯化，创造出具有较高抑制血管内皮细胞及内皮干细胞生长及迁移的多肽药物，用于肿瘤等内皮细胞生长相关疾病的治疗。
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公开(公告)号：CN1377887A
公开(公告)日：2002-11-06
申请号：CN01108179.1
申请日：2001-04-04
Applicant: 南京大学分子医学研究所 , 南京兰鼎科学技术有限公司
Abstract: 本发明属于生物技术制药中的基因工程生产多肽药物及化学合成多肽药物的技术领域,其目的是利用(1)化学合成HSIFTPETNPRAGLEK多肽,(2)化学合成该多肽的基因,并实现在大肠杆菌中的高效表达,经分离纯化,创造出具有较高抑制血管内皮细胞及内皮干细胞生长及迁移的多肽药物,用于肿瘤等内皮细胞生长相关疾病的治疗。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN1887296A
公开(公告)日：2007-01-03
申请号：CN200610040863.7
申请日：2006-07-31
Applicant: 南京大学生物制药工程研究中心
Abstract: 本发明公开了一种诱导抗肿瘤免疫的方法及其在制药中的应用。该方法利用103～104剂量活骨髓瘤FO细胞诱导抗肿瘤免疫；或者，利用GM－CSF转染的骨髓瘤FO细胞冻干粉诱导抗肿瘤免疫；或者，利用原代人脐静脉血管内皮细胞诱导抗肿瘤免疫；或者，利用肿瘤血管内皮细胞膜表面蛋白提取物诱导抗肿瘤免疫的方法。该方法可用于制备抗肿瘤药物。该方法操作简单，诱导抗肿瘤免疫效果好。
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公开(公告)号：CN102477095A
公开(公告)日：2012-05-30
申请号：CN201010552534.7
申请日：2010-11-22
Applicant: 南京大学
IPC: C07K16/18 , A61K39/395 , A61P31/04 , A61P7/00
Abstract: 本发明属于生物制药领域，具体涉及一种抑制活化巨噬细胞活性的兔抗活化巨噬细胞多克隆抗体，以及该抗体在治疗败血症中的应用。本发明通过盲肠内容物刺激制备小鼠腹腔巨噬细胞，通过粘附法纯化得到活化的小鼠腹腔巨噬细胞，以此为抗原免疫新西兰大白兔，获得了多克隆抗体。经多种小鼠败血症模型炎症，该抗体能有效的预防败血症，减少败血症死亡率。
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公开(公告)号：CN102145182A
公开(公告)日：2011-08-10
申请号：CN201010106810.7
申请日：2010-02-09
Applicant: 南京大学
Abstract: 本发明属于药理学技术领域，具体涉及一种药物心脏毒性的检测方法。本发明解决了治疗肿瘤时可能产生的心脏毒性特别是通过抑制uPA-uPAR系统治疗肿瘤时可能产生的心脏毒性的检测方法的问题。本发明的技术方案由以下步骤组成：整体动物模型，药物对小鼠心脏毒性指标的测定，用心室重量与小鼠体重(body weight，BW)的比值(VW/BW，g/g％)作为药物心脏毒性的指标。细胞模型，药物对小鼠心肌细胞毒性指标的测定，以药物刺激心肌细胞后的ERK1/2的相对磷酸化值(磷酸化ERK1/2的光密度/总ERK1/2的光密度，P/T ERK1/2)作为药物心肌细胞毒性的指标。
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公开(公告)号：CN102095871A
公开(公告)日：2011-06-15
申请号：CN200910232208.5
申请日：2009-12-09
Applicant: 南京大学
IPC: G01N33/68 , G01N33/577
Abstract: 一种利用噬菌体抗体库针对人血浆蛋白组的亲和配体筛选的方法。本发明采用“组对组”的筛选策略，将噬菌体抗体库应用于整个被生物素标记的人血浆蛋白组，在液相实现二者的亲和吸附与分离，再对具有人血浆蛋白组分特异结合性的噬菌体抗体进行单克隆化与阳性鉴定，然后利用交联剂将阳性单克隆噬菌体交联成可用于亲和纯化的基质，用于人血浆蛋白组中对应目标抗原的纯化，最后用质谱技术实现目标抗原的鉴定，从而达到高效、迅速并且高通量地为任意人血浆蛋白组的组分筛选亲和配体的目的。
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公开(公告)号：CN1706945A
公开(公告)日：2005-12-14
申请号：CN200410055549.7
申请日：2004-08-04
Applicant: 南京大学
IPC: C12N15/12 , C12N15/70 , C07K14/435 , C07K1/14 , G01N33/68
Abstract: 本发明涉及重组人beta－分泌酶(简称rhBACE)的制备及活性测定方法，由此建立了rhBACE抑制剂筛选系统。本发明将pro－rhBACE克隆到大肠杆菌表达质粒pET28a载体中，构建pro－rhBACE－pET28a重组表达质粒并在E.Coli Rosseta中表达。包涵体中的表达产物溶于6mol/L盐酸胍，经Ni－Sepharose亲和层析纯化后，得到高纯度的pro－rhBACE蛋白。此蛋白在复性液中重新折叠后，于酸性条件(pH4.5)下激活，切去酶原序列，产生有活性的rhBACE蛋白。本发明利用人工合成的荧光17肽底物测定rhBACE活性。本方法制备的rhBACE可用于开展对阿尔茨海默病发生机理的研究及抗阿尔茨海默病药物的筛选。
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