公开(公告)号：CN101886105A

公开(公告)日：2010-11-17

申请号：CN200910026562.2

申请日：2009-05-12

Applicant: 南京大学

Inventor： 刘建宁 ,  孙自勇 ,  蒋爱芹

IPC: C12P21/02 ,  C12N15/62 ,  C12N15/63 ,  C12N1/21 ,  C07K14/605 ,  C07K1/16 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明利用微型蛋白内含子制备胰高血糖素样肽-1。Ssp DnaB蛋白质内含子(intein)其N-末端的106个氨基酸(inteinN)和C-末端的48个氨基酸(intein C)，形成的Ssp DanB微型蛋白质内含子具有完整的剪接功能。将intein C与胰高血糖素样肽-1融合蛋白(inteinC-GLP)在大肠杆菌内进行表达，intein N在大肠杆菌中进行表达，并以Ni-Sepharose进行纯化。纯化后的inteinC-GLP与intein N在pH6.2的磷酸盐缓冲体系中进行拼接，释放出重组胰高血糖素样肽-1。拼接产物上样于Ni-Sepharose，GLP-1存在于穿过液中，其它蛋白被吸附于Ni-Sepharose柱上。将GLP-1粗品进一步浓缩纯化得到纯品，MALDI-TOF质谱分析，与理论分子量相符合。葡萄糖耐受实验结果证明，与对照相比GLP-1(7-36)能有效降低小鼠血糖水平。