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公开(公告)号：CN1706945A
公开(公告)日：2005-12-14
申请号：CN200410055549.7
申请日：2004-08-04
Applicant: 南京大学
IPC: C12N15/12 , C12N15/70 , C07K14/435 , C07K1/14 , G01N33/68
Abstract: 本发明涉及重组人beta－分泌酶(简称rhBACE)的制备及活性测定方法，由此建立了rhBACE抑制剂筛选系统。本发明将pro－rhBACE克隆到大肠杆菌表达质粒pET28a载体中，构建pro－rhBACE－pET28a重组表达质粒并在E.Coli Rosseta中表达。包涵体中的表达产物溶于6mol/L盐酸胍，经Ni－Sepharose亲和层析纯化后，得到高纯度的pro－rhBACE蛋白。此蛋白在复性液中重新折叠后，于酸性条件(pH4.5)下激活，切去酶原序列，产生有活性的rhBACE蛋白。本发明利用人工合成的荧光17肽底物测定rhBACE活性。本方法制备的rhBACE可用于开展对阿尔茨海默病发生机理的研究及抗阿尔茨海默病药物的筛选。
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