公开(公告)号：CN117264947A

公开(公告)日：2023-12-22

申请号：CN202210662170.0

申请日：2022-06-13

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 吴俊 ,  明美玲 ,  龙虹郡 ,  叶志成 ,  陈佳丽 ,  田荣 ,  孙聪睿 ,  薛雍松 ,  李甲明 ,  赵渴娇

IPC: C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  C12N15/66 ,  C12N15/29 ,  C12N15/82 ,  C12N15/84 ,  A01H5/00 ,  A01H6/74

Abstract: 本发明公开了一种梨CRISPR/Cas9基因编辑系统及其应用，属于植物基因工程技术领域。包括靶基因的选择；sgRNA的设计；CRISPR/Cas9基因编辑载体的构建；梨愈伤组织的遗传转化；愈伤组织中CRISPR/Cas9基因编辑效率的鉴定与统计；基因定向编辑的愈伤组织表型观察与分析。本发明首先比较了四种不同的CRISPR/Cas9表达系统在梨愈伤组织中的编辑效率，从而筛选出编辑效率高达100％的一个系统对梨中花青苷和木质素生物合成相关基因进行定向编辑和功能验证，为梨中基因功能研究和分子遗传育种提供了更高效简便的途径。

公开(公告)号：CN114891793A

公开(公告)日：2022-08-12

申请号：CN202210660916.4

申请日：2022-06-13

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 吴俊 ,  明美玲 ,  龙虹郡 ,  叶志成 ,  陈佳丽 ,  田荣 ,  李甲明 ,  汪润泽 ,  单燕飞

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/55 ,  C12N15/84 ,  A01H4/00 ,  A01H5/00 ,  A01H6/74

Abstract: 本发明公开了一种梨CRISPRa基因转录激活系统及其应用，属于植物基因工程技术领域。包括靶基因的选择；sgRNA的设计；CRISPRa基因转录激活载体的构建；梨愈伤组织的遗传转化；愈伤组织中梨CRISPRa基因转录激活倍数的统计与分析；靶基因转录激活的愈伤组织表型鉴定与分析。本发明构建了一种高效的梨CRISPRa基因转录激活系统，并实现了梨花青苷代谢通路靶基因PybZIPa的单基因激活以及PyMYB114和PybHLH3双基因激活，PyDFR、PyANS和PyUFGT的多基因同时激活，得到了与预期相符的基因功能获得型的表型和花青苷合成结构基因的表达模式，对梨花青苷代谢通路相关靶基因进行了功能鉴定，为梨中基因功能研究和分子遗传育种提供了更高效简便的途径。