公开(公告)号：CN114107366B

公开(公告)日：2023-09-22

申请号：CN202111341800.6

申请日：2021-11-12

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 吴俊 ,  薛雍松 ,  单燕飞 ,  薛程 ,  刘东亮 ,  李甲明 ,  赵渴娇 ,  汪润泽

IPC: C12N15/82 ,  C12N15/29 ,  A01H5/08 ,  A01H6/74 ,  A01H4/00

Abstract: 本发明公开了一种梨果肉愈伤组织木质素合成的高效诱导体系及应用。该高效诱导体系，由继代培养基和处理培养基组成；所述的继代培养基通过以下方法配制：1L水中加入4.74g MS固体培养基和30g蔗糖并加热溶解，调pH至5.8～6.0，然后加入8g琼脂粉和4.5uM 2,4‑D；所述的处理培养基通过以下方法配制：1L水中加入4.74g MS固体培养基和30g蔗糖并加热溶解，调pH至5.8～6.0，然后加入8g琼脂粉和EBR(表油菜素内酯)，其中EBR浓度为0～10uM。该体系具有实用、高效的优点，为梨石细胞相关基因在同源系统中基因功能验证提供更高效、便捷的途径。

公开(公告)号：CN114774347A

公开(公告)日：2022-07-22

申请号：CN202210246470.0

申请日：2022-03-14

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 吴俊 ,  曹贝贝 ,  朱荣香 ,  李甲明 ,  明美玲 ,  余金珊 ,  赵永琪 ,  汪润泽 ,  单燕飞 ,  赵渴姣

IPC: C12N5/04

Abstract: 本发明公开了一种梨茎原生质体的分离方法。本发明的方法包括组织酶解、原生质体释放、纯化的步骤。其中原生质体释放对象为酶解后的植物组织残渣，经过多次的释放过程，获得大量完整的原生质体；经过蔗糖界面离心纯化方法，获得背景干净的原生质体，对梨遗传重组、体细胞杂交、以及单细胞测序等具有重大意义。

公开(公告)号：CN114107366A

公开(公告)日：2022-03-01

申请号：CN202111341800.6

申请日：2021-11-12

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 吴俊 ,  薛雍松 ,  单燕飞 ,  薛程 ,  刘东亮 ,  李甲明 ,  赵渴娇 ,  汪润泽

IPC: C12N15/82 ,  C12N15/29 ,  A01H5/08 ,  A01H6/74 ,  A01H4/00

Abstract: 本发明公开了一种梨果肉愈伤组织木质素合成的高效诱导体系及应用。该高效诱导体系，由继代培养基和处理培养基组成；所述的继代培养基通过以下方法配制：1L水中加入4.74g MS固体培养基和30g蔗糖并加热溶解，调pH至5.8～6.0，然后加入8g琼脂粉和4.5uM 2,4‑D；所述的处理培养基通过以下方法配制：1L水中加入4.74g MS固体培养基和30g蔗糖并加热溶解，调pH至5.8～6.0，然后加入8g琼脂粉和EBR(表油菜素内酯)，其中EBR浓度为0～10uM。该体系具有实用、高效的优点，为梨石细胞相关基因在同源系统中基因功能验证提供更高效、便捷的途径。

公开(公告)号：CN116199758A

公开(公告)日：2023-06-02

申请号：CN202310192142.1

申请日：2023-03-02

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 吴俊 ,  薛雍松 ,  单燕飞 ,  薛程 ,  汪润泽 ,  刘东亮 ,  徐少卓

IPC: C07K14/415 ,  C12N15/29 ,  C12N15/84 ,  C12N1/21 ,  C12N15/11 ,  A01H5/08 ,  A01H5/02 ,  A01H5/00 ,  A01H6/20 ,  A01H6/74

Abstract: 本发明公开了梨转录因子PbrMYB24及其促进石细胞中木质素和纤维素合成应用。分离自‘砀山酥梨’的转录因子PbrMYB24基因，其核苷酸序列为SEQ IDNo.1所示。通过在梨果实中瞬时过量表达，证实了PbrMYB24可以促进果实石细胞和木质素和纤维素的积累过程；过表达PbrMYB24的转基因梨果肉愈伤组织和拟南芥花序茎中，木质素含量和纤维素含量显著增加，同时间苯三酚盐酸染色，翻红固绿染色和卡尔科弗卢尔荧光染色信号显著增强。由此证明PbrMYB24基因参与调控梨果实石细胞中木质素和纤维素的形成。

公开(公告)号：CN114891793A

公开(公告)日：2022-08-12

申请号：CN202210660916.4

申请日：2022-06-13

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 吴俊 ,  明美玲 ,  龙虹郡 ,  叶志成 ,  陈佳丽 ,  田荣 ,  李甲明 ,  汪润泽 ,  单燕飞

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/55 ,  C12N15/84 ,  A01H4/00 ,  A01H5/00 ,  A01H6/74

Abstract: 本发明公开了一种梨CRISPRa基因转录激活系统及其应用，属于植物基因工程技术领域。包括靶基因的选择；sgRNA的设计；CRISPRa基因转录激活载体的构建；梨愈伤组织的遗传转化；愈伤组织中梨CRISPRa基因转录激活倍数的统计与分析；靶基因转录激活的愈伤组织表型鉴定与分析。本发明构建了一种高效的梨CRISPRa基因转录激活系统，并实现了梨花青苷代谢通路靶基因PybZIPa的单基因激活以及PyMYB114和PybHLH3双基因激活，PyDFR、PyANS和PyUFGT的多基因同时激活，得到了与预期相符的基因功能获得型的表型和花青苷合成结构基因的表达模式，对梨花青苷代谢通路相关靶基因进行了功能鉴定，为梨中基因功能研究和分子遗传育种提供了更高效简便的途径。

公开(公告)号：CN114774347B

公开(公告)日：2023-07-04

申请号：CN202210246470.0

申请日：2022-03-14

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 吴俊 ,  曹贝贝 ,  朱荣香 ,  李甲明 ,  明美玲 ,  余金珊 ,  赵永琪 ,  汪润泽 ,  单燕飞 ,  赵渴姣

IPC: C12N5/04

Abstract: 本发明公开了一种梨茎原生质体的分离方法。本发明的方法包括组织酶解、原生质体释放、纯化的步骤。其中原生质体释放对象为酶解后的植物组织残渣，经过多次的释放过程，获得大量完整的原生质体；经过蔗糖界面离心纯化方法，获得背景干净的原生质体，对梨遗传重组、体细胞杂交、以及单细胞测序等具有重大意义。