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公开(公告)号：CN110904055B
公开(公告)日：2023-10-13
申请号：CN201911119406.0
申请日：2019-11-15
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明提供了猪繁殖与呼吸综合征病毒重组疫苗株PRRSV‑SP及其制备方法与应用。本发明将疫苗株SP的T3448A位点突变，得到重组疫苗株PRRSV‑SP。本发明将一株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒湖北分离株HUB2的主要结构蛋白GP5和M的基因ORF5和ORF6放进重组疫苗株PRRSV‑SP相应编码区域进行表达，获得了嵌合毒株vSP‑Hub2。本发明提供的重组疫苗株PRRSV‑SP和嵌合毒株vSP‑Hub2没有明显的致病性，可以作为进一步研究弱毒疫苗及PRRSV毒株变异机制的基础材料，通过感染性克隆系统构建新的弱毒疫苗株的成功，也可用于制备抗PRRSV同源以及异源毒株的新型高效广谱疫苗。
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公开(公告)号：CN111926025B
公开(公告)日：2023-05-05
申请号：CN202010346610.2
申请日：2020-04-27
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明涉及反向遗传操作技术领域，公开了一株经过密码子替换的基因Ⅶ型新城疫病毒的拯救方法。分别将新城疫病毒的NP、P和L基因以及表达T7 RNA聚合酶的DE3基因克隆进pXJ40载体，获得质粒pXJ40‑NP、pXJ40‑P、pXJ40‑L和pXJ40‑DE3；将新城疫病毒的全基因组cDNA克隆进pBR322质粒中得到pBR322‑DHN3；将NP基因编码区部分密码子统一替换成使用频率最高的密码子，替换到pBR322‑DHN3质粒上，形成新质粒pBR322‑mNPDHN3；采用上述5种质粒共转染BHK‑21细胞，得到拯救病毒rDHN3‑mNP。本发明方法更利于病毒的拯救和病毒致病机制的研究。
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公开(公告)号：CN112813038A
公开(公告)日：2021-05-18
申请号：CN202110102802.3
申请日：2021-01-26
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明公开了一株表达ASFV结构囊膜蛋白的PRRS病毒及其构建方法与应用。本发明通过将ASFV结构囊膜蛋白基因克隆入上游设置T7启动子的PRRS病毒基因组中的非结构蛋白基因与结构蛋白基因之间；在结构囊膜蛋白基因和结构蛋白基因之间设置调控序列；再对所得到的序列进行转录，得到的RNA转染细胞，收集病变的细胞，得到表达ASFV结构囊膜蛋白的PRRS病毒。本发明提供的构建方法可快速获得含有ASFV和PRRSV免疫原的重组病毒，从而为开发多效价疫苗奠定基础。
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公开(公告)号：CN111926025A
公开(公告)日：2020-11-13
申请号：CN202010346610.2
申请日：2020-04-27
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明涉及反向遗传操作技术领域，公开了一株经过密码子替换的基因Ⅶ型新城疫病毒的拯救方法。分别将新城疫病毒的NP、P和L基因以及表达T7 RNA聚合酶的DE3基因克隆进pXJ40载体，获得质粒pXJ40-NP、pXJ40-P、pXJ40-L和pXJ40-DE3；将新城疫病毒的全基因组cDNA克隆进pBR322质粒中得到pBR322-DHN3；将NP基因编码区部分密码子统一替换成使用频率最高的密码子，替换到pBR322-DHN3质粒上，形成新质粒pBR322-mNPDHN3；采用上述5种质粒共转染BHK-21细胞，得到拯救病毒rDHN3-mNP。本发明方法更利于病毒的拯救和病毒致病机制的研究。
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公开(公告)号：CN115094088A
公开(公告)日：2022-09-23
申请号：CN202210412508.7
申请日：2022-04-19
Applicant: 华南农业大学 , 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
Abstract: 本发明属于生物工程技术领域，公开了一种pSFV‑flagX‑CMV复制子质粒，采用含塞姆利基森林病毒复制子的载体，并将p54，p22，p32，p72，pCD2v，M448R，MGF505‑7R和M1249L基因分别插入所述载体而得；所述p54，p22，p32，p72，pCD2v，M448R，MGF505‑7R基因序列依次如SEQ ID NO.15‑NO.21所示。该质粒通过插入非洲猪瘟抗原基因(X)，制得的pSFV‑flagX‑CMV复制子质粒在真核细胞能够高效表达ASFV抗原蛋白，有利于非洲猪瘟鸡尾酒DNA疫苗的研制，也有利于通过Flag抗体胶对这些蛋白进行纯化，制取有别于原核表达的，具备翻译后修饰的高质量抗原蛋白；同时，本发明还公开了该质粒的制备方法和鸡尾酒混合疫苗。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110904055A
公开(公告)日：2020-03-24
申请号：CN201911119406.0
申请日：2019-11-15
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明提供了猪繁殖与呼吸综合征病毒重组疫苗株PRRSV-SP及其制备方法与应用。本发明将疫苗株SP的T3448A位点突变，得到重组疫苗株PRRSV-SP。本发明将一株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒湖北分离株HUB2的主要结构蛋白GP5和M的基因ORF5和ORF6放进重组疫苗株PRRSV-SP相应编码区域进行表达，获得了嵌合毒株vSP-Hub2。本发明提供的重组疫苗株PRRSV-SP和嵌合毒株vSP-Hub2没有明显的致病性，可以作为进一步研究弱毒疫苗及PRRSV毒株变异机制的基础材料，通过感染性克隆系统构建新的弱毒疫苗株的成功，也可用于制备抗PRRSV同源以及异源毒株的新型高效广谱疫苗。
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公开(公告)号：CN112048484A
公开(公告)日：2020-12-08
申请号：CN202010730869.7
申请日：2020-07-27
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明属于兽用生物制品技术领域，公开了一株表达传染性法氏囊强毒株VP2蛋白的基因Ⅶ型新城疫重组病毒，所述重组病毒在病毒rDHN3mF的P基因和M基因之间插入VP2蛋白编码基因得到，所述VP2蛋白编码基因如序列表SEQ ID NO：2所述，所述病毒rDHN3‑mF的序列表如SEQ ID NO：1所述。该重组病毒为弱毒型、应用后具有较强烈的保护性免疫反应、是针对流行毒株的NDV/IBDV二联疫苗的具有实用性的潜在毒株，同时本发明还公开了该重组病毒的制备方法和疫苗。
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公开(公告)号：CN111019966A
公开(公告)日：2020-04-17
申请号：CN201911367696.0
申请日：2019-12-26
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体为一种具有较髙棒状杆菌复制能力的表达质粒，所述表达质粒的第1786位点的核苷酸为A或G，其余位点与质粒pXMJ19相同；所述表达质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:14所示。通过在pXMJ19载体的棒状杆菌复制子调节部位，将第1786位点的核苷酸C进行人工突变，成功获得2株比pXMJ19质粒拷贝能力高6～8.5倍的棒状杆菌/大肠杆菌双用载体pXMJ19C1786A和pXMJ19C1786G质粒，pXMJ19C1786A拷贝数约为115，pXMJ19C1786G质粒的拷贝数约为170。
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公开(公告)号：CN111019966B
公开(公告)日：2023-01-24
申请号：CN201911367696.0
申请日：2019-12-26
Applicant: 华南农业大学
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体为一种具有较髙棒状杆菌复制能力的表达质粒，所述表达质粒的第1786位点的核苷酸为A或G，其余位点与质粒pXMJ19相同；所述表达质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:14所示。通过在pXMJ19载体的棒状杆菌复制子调节部位，将第1786位点的核苷酸C进行人工突变，成功获得2株比pXMJ19质粒拷贝能力高6～8.5倍的棒状杆菌/大肠杆菌双用载体pXMJ19C1786A和pXMJ19C1786G质粒，pXMJ19C1786A拷贝数约为115，pXMJ19C1786G质粒的拷贝数约为170。
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公开(公告)号：CN115074389A
公开(公告)日：2022-09-20
申请号：CN202210661981.9
申请日：2022-06-13
Applicant: 华南农业大学 , 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司
IPC: C12N15/867 , C12N15/11 , C12N15/66 , C12N15/40 , C12N5/10 , C12Q1/70 , G01N33/569 , G01N33/58 , C12R1/91 , C12R1/93
Abstract: 本发明公开了一种稳定表达鸭坦布苏病毒NS1蛋白的细胞系的构建方法及其应用，涉及分子生物学技术领域。该构建方法包括：(1)采用构建重组质粒；(2)采用所述重组质粒转染细胞，得到重组细胞；(3)将重组细胞和慢病毒包装质粒共同培养，得到慢病毒样颗粒的培养液；(4)将慢病毒样颗粒的培养液感染宿主细胞，筛选得到稳定株，培养后获得细胞系。实施本发明，可稳定提升NS1mRNA和蛋白的表达水平。
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