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公开(公告)号：CN101381723B
公开(公告)日：2012-07-18
申请号：CN200810000775.3
申请日：2008-01-16
Abstract: 本发明涉及结缕草中胁迫诱导型启动子Rd29A的克隆和功能鉴定，其主要步骤包括：以结缕草为植物材料，提取植物总DNA，利用生物软件设计一对特异引物，经过PCR扩增方法获得了Rd29A启动子序列，并以pBI121为基础，分别构建了pBIG(35S-GFP)和pBIRG(Rd29A-GFP)两个植物真核表达载体，采用基因枪法对洋葱表皮细胞进行转化，检测Rd29A启动子在受体细胞中调控GFP基因表达的活性。本发明能筛选出适用于草坪草转基因的诱导型启动子Rd29A，Rd29A启动子是一个受干旱、盐碱和低温等逆境诱导表达的特异性启动子，也是植物抗逆性基因工程中理想的逆境诱导型启动子，对于逆境条件下草坪草的生长发育有重要意义。
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公开(公告)号：CN100386438C
公开(公告)日：2008-05-07
申请号：CN200510085474.1
申请日：2005-07-21
Abstract: 本专利采用基因枪转化法对草地早熟禾胚性愈伤组织进行轰击，建立了一套完整、高效的遗传转化体系。适合于草地早熟禾的基因枪转化参数为：Ca(NO3)2+PEG4000包被质粒DNA；使用1μm金粉作为质粒DNA的载体；处理1(打枪高度6cm、轰击1次、无渗透处理)与处理5(打枪高度6cm、轰击2次、有渗透处理)进行轰击，转化效果最好。适合于转化愈伤筛选的抗生素浓度为100mg/L。运用此转化体系，成功将三种与干旱、盐胁迫有关的功能基因转入草地早熟禾愈伤组织中，获得了转基因植株。转化频率高达3.92%。
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公开(公告)号：CN101139604A
公开(公告)日：2008-03-12
申请号：CN200610126822.X
申请日：2006-09-06
Applicant: 北京林业大学
IPC: C12N15/29 , C12N15/82 , C07K14/415
Abstract: 本发明从优良草坪草种结缕草中克隆了GA20氧化酶基因及构建了其植物表达载体。通过简并PCR和RACE的方法，从我国野生的结缕草中克隆出了GA20氧化酶基因，该基因全长1311bp，编码区长1109bp，编码区在96－1205bp之间，编码369个氨基酸。其与大麦、小麦和水稻等有65％的同源性。在GenBank上的登录号为：DQ645453。同时以pC1303为基础，分别构建了GA20氧化酶的正义和反义表达载体，该载体含GUS报告基因和潮霉素标记基因，可用于坪草的基因工程育种，以培育矮化型转基因草坪草。
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公开(公告)号：CN101045935A
公开(公告)日：2007-10-03
申请号：CN200710064240.8
申请日：2007-03-07
Abstract: 本发明提供了结缕草高频基因枪转化方法，建立了一套完整、高效的遗传转化体系。本发明基因枪法转化的具体参数是：选用直径为1μm的金粉、每枪250μg金粉+0.5μg DNA、5cm的轰击距离、轰击3次的基因枪转化参数，选择诱导4个月、继代培养25d左右的胚性愈伤组织进行基因枪轰击，靶材料在轰击前4h至轰击后12h间，培养于含有0.2M的甘露醇及0.2M的山梨醇高渗培养基上。本发明还进一步将可综合提高植物抗旱、耐寒、耐盐性的DREB1A基因转入日本结缕草胚性愈伤组织中，获得了转基因植株。并且确立了结缕草转化子的潮霉素筛选方案。
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公开(公告)号：CN100336444C
公开(公告)日：2007-09-12
申请号：CN200510085473.7
申请日：2005-07-21
IPC: A01H4/00
Abstract: 本专利对草地早熟禾Baron、Mardona、Midnight品种进行了组织培养研究，表明选择成熟种子作为外植体诱导愈伤组织，消毒时运用磁力搅拌消毒，蒸馏水洗净后直接接种为宜；选择易碎、干燥的胚性愈伤进行继代培养，在8个月内能够保持其再生能力；再生2个月的组培苗，移栽到花盆中能够100%成活，在田间生长健壮；运用正交设计与单因素实验设计的方法，建立了三种草地早熟禾品种的高频再生体系，胚性愈伤诱导率高达31.67%，愈伤组织分化率高达56.67%。运用其中Baron品种的再生体系进行基因枪转化，获得了转DREB1A、BADH-CMO、CMO基因的转化植株。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN1732758A
公开(公告)日：2006-02-15
申请号：CN200510085471.8
申请日：2005-07-21
Abstract: 本发明一种建立多年生黑麦草高频再生体系的方法，是为遗传转化工作提供良好的受体材料。主要步骤包括：种子的消毒，以成熟胚为外植体在愈伤诱导培养基上诱导胚性愈伤组织，继代培养后转入再生培养基中分化出再生小苗，而后转入生根培养基中壮苗生根，获得完整植株后移栽。本发明选用了取材简便且不受季节限制的最佳外植体，消毒方式安全有效。通过调控愈伤诱导、分化和生根培养基中各激素和添加物的浓度，有效提高了胚性愈伤诱导率，且在继代培养过程中始终保持愈伤的胚性结构；再生率和生根率很高，移栽成活率为100％。
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公开(公告)号：CN103173562B
公开(公告)日：2014-12-17
申请号：CN201310127570.2
申请日：2013-04-12
Applicant: 北京林业大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明公开一种枣树SSR标记分子遗传图谱的构建方法，包括如下步骤：1）提取待测枣树亲本和子代的基因组DNA；2）以亲本材料筛选SSR引物；3）分别利用上述SSR引物，各自以待测枣树亲本和子代的基因组DNA为模版，进行PCR扩增；4）利用生物学软件分析PCR扩增结果，构建枣树SSR标记分子遗传图谱。本发明建立了高效低成本的枣树SSR标记技术体系，获得的SSR标记和核心引物组，具有高效性、稳定性和共显性等优点。利用该套标记可以进行枣树遗传图谱构建、遗传多样性分析、品种鉴定和分子标记辅助育种等研究，推动枣树遗传学和育种技术的发展。
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公开(公告)号：CN103173562A
公开(公告)日：2013-06-26
申请号：CN201310127570.2
申请日：2013-04-12
Applicant: 北京林业大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明公开一种枣树SSR标记分子遗传图谱的构建方法，包括如下步骤：1）提取待测枣树亲本和子代的基因组DNA；2）以亲本材料筛选SSR引物；3）分别利用上述SSR引物，各自以待测枣树亲本和子代的基因组DNA为模版，进行PCR扩增；4）利用生物学软件分析PCR扩增结果，构建枣树SSR标记分子遗传图谱。本发明建立了高效低成本的枣树SSR标记技术体系，获得的SSR标记和核心引物组，具有高效性、稳定性和共显性等优点。利用该套标记可以进行枣树遗传图谱构建、遗传多样性分析、品种鉴定和分子标记辅助育种等研究，推动枣树遗传学和育种技术的发展。
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公开(公告)号：CN101381723A
公开(公告)日：2009-03-11
申请号：CN200810000775.3
申请日：2008-01-16
Abstract: 本发明涉及结缕草中胁迫诱导型启动子Rd29A的克隆和功能鉴定，其主要步骤包括：以结缕草为植物材料，提取植物总DNA，利用生物软件设计一对特异引物，经过PCR扩增方法获得了Rd29A启动子序列，并以pBI121为基础，分别构建了pBIG(35S－GFP)和pBIRG(Rd29A－GFP)两个植物真核表达载体，采用基因枪法对洋葱表皮细胞进行转化，检测Rd29A启动子在受体细胞中调控GFP基因表达的活性。本发明能筛选出适用于草坪草转基因的诱导型启动子Rd29A，Rd29A启动子是一个受干旱、盐碱和低温等逆境诱导表达的特异性启动子，也是植物抗逆性基因工程中理想的逆境诱导型启动子，对于逆境条件下草坪草的生长发育有重要意义。
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公开(公告)号：CN1291024C
公开(公告)日：2006-12-20
申请号：CN200510085470.3
申请日：2005-07-21
Abstract: 本发明一种高效获得多年生黑麦草转基因植株的农杆菌介导转化体系及其应用，包括以下步骤：通过高频再生体系获得胚性愈伤受体材料；供体菌株的培养；抑菌素浓度的确定；农杆菌转化条件的优化；转化愈伤的筛选培养和植株再生和抗性植株的分子检测。通过优化农杆菌转化时所涉及到的各项影响条件，包括菌液浓度、侵染时间、侵染条件、共培养时间、抑菌素的添加浓度等，提供了一种适用于多年生黑麦草的农杆菌介导转化体系。克服了现有农杆菌介导技术难以应用于禾本科植物遗传转化的缺陷，建立起了以胚性愈伤为受体材料的高效多年生黑麦草农杆菌介导转化体系。
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