公开(公告)号：CN110499309A

公开(公告)日：2019-11-26

申请号：CN201910757410.3

申请日：2019-08-16

Applicant: 北京林业大学

Inventor： 林金星 ,  郑文清 ,  张曦 ,  冯圣年 ,  王树芳 ,  祝蕾 ,  毋瑞华

IPC: C12N15/10 ,  C12N15/81 ,  C12Q1/6876

Abstract: 本发明涉及一种基于酵母双杂交技术筛选膜蛋白互作蛋白的方法，通过采诱饵蛋白载体的选择、进行自激活检测及诱饵载体功能验证、进行膜体系双杂交文库筛选酵母、质粒提取、酵母质粒的扩繁等步骤，优化了诱饵载体的选择，筛选合适的诱饵载体，可以最大限度的筛选到更多的互作蛋白；优化了酵母感受态细胞的制备过程，通过一种接近于定量的方法较好得把握了摇菌的过程，可以使酵母感受态细胞的状态达到最优，比较有利于文库的表达，可以较好地把握实验进度，提高了实验稳定性；基于泛素系统的膜蛋白互作最后的PCR验证，极大促进了膜蛋白互作研究方法的高效性和稳定性，为科研工作者提供了先进的技术手段和理论基础。

公开(公告)号：CN111323284A

公开(公告)日：2020-06-23

申请号：CN202010036704.X

申请日：2020-01-14

Applicant: 北京林业大学

Inventor： 林金星 ,  郑文清 ,  张原 ,  杜亮 ,  冯圣年

IPC: G01N1/30 ,  G01N1/34 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明涉及一种烟草叶片和原生质体的线粒体荧光标记方法，该方法包括以下步骤：步骤一、配制含有Mitotracker Red CMXRos染料的工作液；步骤二、分离烟草叶片和原生质体，将烟草叶片和原生质体在含有Mitotracker Red CMXRos染料的工作液中染色；步骤三、采用缓冲液对已染色的烟草叶片和原生质体进行清洗；步骤四、采用激光共聚焦显微镜对经过步骤三种清洗好的烟草叶片和原生质体观察拍照，其中激发波长为559nm，发射波长为600-630nm。本发明提供一种操作简单、节约时间、染色效果好的烟草叶片和原生质体的线粒体荧光标记方法。