公开(公告)号：CN110499309A

公开(公告)日：2019-11-26

申请号：CN201910757410.3

申请日：2019-08-16

Applicant: 北京林业大学

Inventor： 林金星 ,  郑文清 ,  张曦 ,  冯圣年 ,  王树芳 ,  祝蕾 ,  毋瑞华

IPC: C12N15/10 ,  C12N15/81 ,  C12Q1/6876

Abstract: 本发明涉及一种基于酵母双杂交技术筛选膜蛋白互作蛋白的方法，通过采诱饵蛋白载体的选择、进行自激活检测及诱饵载体功能验证、进行膜体系双杂交文库筛选酵母、质粒提取、酵母质粒的扩繁等步骤，优化了诱饵载体的选择，筛选合适的诱饵载体，可以最大限度的筛选到更多的互作蛋白；优化了酵母感受态细胞的制备过程，通过一种接近于定量的方法较好得把握了摇菌的过程，可以使酵母感受态细胞的状态达到最优，比较有利于文库的表达，可以较好地把握实验进度，提高了实验稳定性；基于泛素系统的膜蛋白互作最后的PCR验证，极大促进了膜蛋白互作研究方法的高效性和稳定性，为科研工作者提供了先进的技术手段和理论基础。