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公开(公告)号：CN111233996A
公开(公告)日：2020-06-05
申请号：CN202010064919.2
申请日：2020-01-20
Applicant: 北京交通大学
Abstract: 本发明提供了一种将丁酸钠用于促进工程细胞株分泌表达rhIL-24的方法，属于基因表达技术领域，在对分泌表达rhIL-24的定点整合工程细胞株FCHO/IL-24进行10％血清贴壁、0.5％血清贴壁和0.5％血清悬浮培养的基础上，用不同终浓度(0、0.125、0.25、0.5、1和2mmol/L)丁酸钠处理细胞株。本发明中，NaBu可以提高CHO细胞分泌表达外源蛋白的水平，促进工程细胞分泌表达rhIL-24的水平，促使工程细胞发生G0/G1期阻滞，并可改变贴壁培养条件下细胞的代谢活力；将NaBu作为细胞株无血清培养基的添加剂，在高密度的悬浮培养中，提高了细胞株分泌表达rhIL-24的水平，不仅为FCHO/IL-24细胞的大规模培养提供实验数据，同时也可为用哺乳动物细胞表达其他基因工程蛋白提供借鉴。
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公开(公告)号：CN107118269B
公开(公告)日：2020-12-01
申请号：CN201710414629.4
申请日：2017-06-05
Applicant: 北京交通大学
Abstract: 本发明公开了一种重组人IL‑24蛋白(rhIL‑24)的PEG修饰方法,包括：a.构建人IL‑24的重组原核表达载体，诱导表达，得到包涵体；b.选择变性剂对所述包涵体进行变性，得到变性后的蛋白；c.确定复性条件，对所述变性后的蛋白进行复性，得到复性后的蛋白；d.在对所述复性后的蛋白添加SDS的条件下，进行凝胶过滤纯化，得到纯化后的目的蛋白；e.对所述纯化后的目的蛋白用PEG修饰剂进行定点修饰，得到终产品。该方法在制备高纯度重组人IL‑24蛋白的基础上，利用聚乙二醇进行定点修饰，在修饰蛋白的周围产生空间屏障，减少蛋白的酶解，延长了半衰期，且不影响其体外抑瘤活性，利用率增加，提高了稳定性和生物学活性。
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公开(公告)号：CN107118269A
公开(公告)日：2017-09-01
申请号：CN201710414629.4
申请日：2017-06-05
Applicant: 北京交通大学
Abstract: 本发明公开了一种重组人IL‑24蛋白(rhIL‑24)的PEG修饰方法,包括：a.构建人IL‑24的重组原核表达载体，诱导表达，得到包涵体；b.选择变性剂对所述包涵体进行变性，得到变性后的蛋白；c.确定复性条件，对所述变性后的蛋白进行复性，得到复性后的蛋白；d.在对所述复性后的蛋白添加SDS的条件下，进行凝胶过滤纯化，得到纯化后的目的蛋白；e.对所述纯化后的目的蛋白用PEG修饰剂进行定点修饰，得到终产品。该方法在制备高纯度重组人IL‑24蛋白的基础上，利用聚乙二醇进行定点修饰，在修饰蛋白的周围产生空间屏障，减少蛋白的酶解，延长了半衰期，且不影响其体外抑瘤活性，利用率增加，提高了稳定性和生物学活性。
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公开(公告)号：CN113337473A
公开(公告)日：2021-09-03
申请号：CN202110411663.2
申请日：2021-04-16
Applicant: 北京交通大学
IPC: C12N5/10
Abstract: 本发明公开了一种工程细胞株FCHO/IL‑24的无血清悬浮培养驯化方法，包括以下步骤：(1)通过梯度降低血清浓度，驯化工程细胞株FCHO/IL‑24能够在0.5％血清贴壁条件下培养；(2)将步骤(1)得到的工程细胞株FCHO/IL‑24直接从0.5％血清贴壁培养驯化为0.5％血清悬浮培养；(3)将步骤(2)得到的工程细胞株FCHO/IL‑24在无血清培养基中悬浮培养。本申请通过梯度降低血清浓度，先驯化工程细胞株FCHO/IL‑24能够在0.5％血清贴壁条件上培养，再进行悬浮培养，最后使其能够在无血清培养基中悬浮培养，不仅能保持较高的细胞密度，同时还能稳定分泌表达rhIL‑24，为后续的悬浮培养条件和无血清培养基成份的优化奠定了基础。
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