公开(公告)号：CN101580872B

公开(公告)日：2012-02-22

申请号：CN200810233641.6

申请日：2008-11-25

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 杨静 ,  李成云 ,  朱有勇 ,  常青 ,  刘林 ,  苏源 ,  于钦亮 ,  王云月 ,  张悦 ,  孔垂思

IPC: C12Q1/68

Abstract: 本发明涉及一种稻瘟病菌侵染后期高度表达的基因及其编码产物的体外功能检测的方法，属于植物保护和生物技术领域。本发明的技术方案是保持目前基因克隆与表达的方法，如引物设计、PCR扩增、real-time PCR、连接、转化、蛋白表达均与常规相同，不同的是该基因为稻瘟病菌侵染水稻后期高度表达的基因，与前人研究的稻瘟病菌基因多为稻瘟病菌侵染早期高度表达的基因有区别，其编码产物是小蛋白，由88个氨基酸组成，相对分子量为8.8kDa，其体外表达产物按照0.5mg/ml～2.5mg/ml的浓度直接接种到致伤的丽江新团黑谷水稻叶片后能引起水稻叶片产生病斑。本发明比传统稻瘟病菌致病性测定方法简便、快速。

公开(公告)号：CN101580872A

公开(公告)日：2009-11-18

申请号：CN200810233641.6

申请日：2008-11-25

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 杨静 ,  李成云 ,  朱有勇 ,  常青 ,  刘林 ,  苏源 ,  于钦亮 ,  王云月 ,  张悦 ,  孔垂思

IPC: C12Q1/68

Abstract: 本发明涉及一种稻瘟病菌侵染后期高度表达的基因及其编码产物的体外功能检测的方法，属于植物保护和生物技术领域。本发明的技术方案是保持目前基因克隆与表达的方法，如引物设计、PCR扩增、real－time PCR、连接、转化、蛋白表达均与常规相同，不同的是该基因为稻瘟病菌侵染水稻后期高度表达的基因，与前人研究的稻瘟病菌基因多为稻瘟病菌侵染早期高度表达的基因有区别，其编码产物是小蛋白，由88个氨基酸组成，相对分子量为8.8kDa，其体外表达产物按照0.5mg/ml～2.5mg/ml的浓度直接接种到致伤的丽江新团黑谷水稻叶片后能引起水稻叶片产生病斑。本发明比传统稻瘟病菌致病性测定方法简便、快速。

公开(公告)号：CN101418346A

公开(公告)日：2009-04-29

申请号：CN200810233642.0

申请日：2008-11-25

Applicant: 云南农业大学

Inventor： 刘林 ,  李成云 ,  朱有勇 ,  李华 ,  杨静 ,  苏源 ,  李进斌 ,  王云月 ,  张悦 ,  孔垂思 ,  于钦亮 ,  梁飞

IPC: C12Q1/68

Abstract: 本发明涉及一种检测稻瘟病菌致病相关基因在侵染的水稻叶片组织中表达量的方法。本发明提供了一种检测稻瘟病菌侵染水稻后不同时间点致病相关基因表达量的方法，该方法的技术方案是：将稻瘟病菌孢子喷雾接种到水稻叶片上，取样并提取总RNA，应用SYBR Green I嵌合荧光法对稻瘟病菌致病相关基因片段进行实时荧光定量PCR检测，记录待测样品的C(t)值，根据公式计算其致病相关基因片段的表达量。采用本方法可快速准确地检测水稻接种稻瘟病菌早期不同时间段稻瘟病菌致病相关基因的表达量；分析不同致病相关基因在不同水稻品种中的表达量及其在接种后不同时间段的变化情况；分析稻瘟病菌致病相关基因的时空表达模式等。其检测结果准确、重复性好，有助于说明这些基因的功能。