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发明公开
一种测定BACE1酶切α-Klotho活性的检测方法及其试剂盒审中-实审

公开(公告)号：CN117265065A

公开(公告)日：2023-12-22

申请号：CN202311404996.8

申请日：2023-10-27

Applicant: 首都医科大学附属北京安定医院

Inventor： 李人 , 高翔

IPC: C12Q1/37 , G16B30/00 , G16B30/10

Abstract: 本发明属于生物技术领域，公开了一种测定BACE1酶切α‑Klotho活性的检测方法，其步骤为：S1、判断是否发生酶切反应；S2、寻找酶切位点；S3、确定酶切位点；S4、验证酶切位点；S5、酶切活性检测。并公开了一种测定BACE1酶切α‑Klotho活性的试剂盒，包括底物储存液、醋酸钠缓冲液和重组人BACE1酶；所述底物储存液中的底物为(Abz)‑GIEFMEAEK‑(Dnp)‑NH2、(Abz)‑ETNLQTAPK‑(Dnp)‑NH2、(Abz)‑EVKMDAEFK‑(Dnp)‑NH2、(Abz)‑SEVNLDAEFRK‑(Dnp)‑NH2或(Abz)‑PEEFTVCTK‑(Dnp)‑NH2；所述醋酸纳缓冲液的组成成分为50mM HOAc和100mM NaCl，用NaOH溶液调整pH＝4.0。本发明证实了α‑Klotho确实是BACE1酶切底物，鉴定出了具体的酶切位点为F‑T，并开发了测定BACE1酶切α‑Klotho活性的检测方法及其试剂盒。

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