利用试纸条检测草鱼呼肠孤病毒的方法、CRISPR-Cas13a系统及其应用

    公开(公告)号:CN116426695A

    公开(公告)日:2023-07-14

    申请号:CN202310393708.7

    申请日:2023-04-13

    Applicant: 长江大学

    Abstract: 本发明公开了一种利用试纸条检测草鱼呼肠孤病毒的方法、CRISPR‑Cas13a系统及其应用,涉及生物技术领域。所述方法包括如下步骤:(1)利用引物对对草鱼呼肠孤病毒基因靶标序列进行RPA扩增,获得RPA扩增产物;(2)针对草鱼呼肠孤病毒基因的靶标设计扩增crRNA的引物对,并根据引物对扩增得到crRNA;(3)将Cas13a蛋白、crRNA、RNA‑reporter、RPA扩增产物、RNase抑制剂、dNTP、T7RNA聚合酶混合等温孵育,进行CRISPR‑Cas13a‑LFD检测;(4)将CRISPR‑Cas13a‑LFD检测产物转入检测缓冲液中,插入胶体金试纸条,观察5~10min后,观察特异性条带。本发明的检测方法具有高度敏感性和高度特异性,通过使用侧流条法来完成,便于携带,结果可以通过目测读取,并且可以轻松量化,大大简化了检测时的操作程序,降低了污染风险。

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