公开(公告)号：CN107893109B

公开(公告)日：2021-07-06

申请号：CN201711092555.3

申请日：2017-11-08

Applicant: 重庆邮电大学

Inventor： 浦丹 ,  赵珊 ,  舒坤贤

IPC: C12Q1/6869 ,  C12Q1/6806

Abstract: 本发明公开了一种基于移除野生型序列的低丰度基因突变富集方法，本发明方法在PCR扩增前对用作DNA模板的样品DNA进行处理，使3'末端被封闭的含突变位点的核苷酸单链作为杂交链与野生型和突变型序列杂交，双链特异性核酸酶能特异性地移除杂交链与野生型序列形成的完全互补配对的同源双链DNA，但不能移除杂交链与突变型序列形成的非完全互补的异源双链DNA。移除后的产物经PCR扩增，PCR扩增所用的一条引物3'末端位于突变位点上且被封闭，在具有3'‑5'校读活性的聚合酶作用下，使野生型序列不能扩增，但突变型序列得以指数扩增，由此有效富集低丰度基因突变序列，提高了富集灵敏度和准确度，同时本发明方法还可以同时富集多种突变型序列从而提高扩增效率。

公开(公告)号：CN107893109A

公开(公告)日：2018-04-10

申请号：CN201711092555.3

申请日：2017-11-08

Applicant: 重庆邮电大学

Inventor： 浦丹 ,  赵珊 ,  舒坤贤

IPC: C12Q1/6869 ,  C12Q1/6806

CPC classification number: C12Q1/6869 ,  C12Q1/6806 ,  C12Q2535/101 ,  C12Q2531/113 ,  C12Q2565/301 ,  C12Q2521/327

Abstract: 本发明公开了一种基于移除野生型序列的低丰度基因突变富集方法，本发明方法在PCR扩增前对用作DNA模板的样品DNA进行处理，使3'末端被封闭的含突变位点的核苷酸单链作为杂交链与野生型和突变型序列杂交，双链特异性核酸酶能特异性地移除杂交链与野生型序列形成的完全互补配对的同源双链DNA，但不能移除杂交链与突变型序列形成的非完全互补的异源双链DNA。移除后的产物经PCR扩增，PCR扩增所用的一条引物3'末端位于突变位点上且被封闭，在具有3'-5'校读活性的聚合酶作用下，使野生型序列不能扩增，但突变型序列得以指数扩增，由此有效富集低丰度基因突变序列，提高了富集灵敏度和准确度，同时本发明方法还可以同时富集多种突变型序列从而提高扩增效率。