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公开(公告)号：CN101481729B
公开(公告)日：2014-04-16
申请号：CN200910010219.9
申请日：2009-01-21
Applicant: 辽宁大学
Abstract: 本发明公开了一种高灵敏度的利用基因突变酵母细胞筛选抗阮病毒药物的方法。采用的技术方案是：将野生型酿酒酵母细胞内的分子伴侣SSA1基因编码的第483位亮氨酸突变为色氨酸，得到基因突变型SSA1-YS1酵母细胞；然后经SSA1-YS1酵母细胞的活化；初始OD值的调试；制备筛选待测药物检测溶液；从第一天起，隔天提取适量SSA1-YS1酵母细胞悬液稀释后平板涂布；置于24℃恒温培养箱中培养3天，再转入4℃冰箱中培养7天，观察SSA1-YS1酵母细胞的颜色。本发明极大地降低药物筛选过程中的假阴性，不仅待测药物的用量少，而且提高了筛选精确度、降低了筛选成本消耗。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101858910B
公开(公告)日：2013-03-27
申请号：CN201010132005.1
申请日：2010-03-25
Applicant: 辽宁大学
IPC: G01N33/561 , C12Q1/02
Abstract: 本发明涉及一种在蛋白质水平精确定量检测抗朊病毒药物作用效果的方法。采用的技术方案是：1)酿酒酵母细胞的活化；2)抗朊病毒药物的初筛选：将待测药物、YPD液体培养基以及调试好的酿酒酵母细胞菌悬液，振荡培养1～5天，通过菌落颜色的变化初步判断待测药物的治疗效果；3)使用SDD-AGE/Western blot的方法，定量检测抗朊病毒药物的作用效果；4)用全自动图像分析系统Dolphin-DOC进行图像扫描，分析。本发明可精确地在蛋白质水平通过检测细胞内朊病毒蛋白聚集体的可溶性变化来评估药物的作用效果；通过定量检测朊病毒蛋白聚集体的分子量大小的变化，完成在蛋白质的水平上判断药物对朊病毒的作用大小。
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公开(公告)号：CN101481729A
公开(公告)日：2009-07-15
申请号：CN200910010219.9
申请日：2009-01-21
Applicant: 辽宁大学
Abstract: 本发明公开了一种高灵敏度的利用基因突变酵母细胞筛选抗朊病毒药物的方法。采用的技术方案是：将野生型酿酒酵母细胞内的分子伴侣SSA1基因编码的第483位亮氨酸突变为色氨酸，得到基因突变型SSA1－YS1酵母细胞；然后经SSA1－YS1酵母细胞的活化；初始OD值的调试；制备筛选待测药物检测溶液；从第一天起，隔天提取适量SSA1－YS1酵母细胞悬液稀释后平板涂布；置于24℃恒温培养箱中培养3天，再转入4℃冰箱中培养7天，观察SSA1－YS1酵母细胞的颜色。本发明极大地降低药物筛选过程中的假阴性，不仅待测药物的用量少，而且提高了筛选精确度、降低了筛选成本消耗。
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公开(公告)号：CN101858910A
公开(公告)日：2010-10-13
申请号：CN201010132005.1
申请日：2010-03-25
Applicant: 辽宁大学
IPC: G01N33/561 , C12Q1/02
Abstract: 本发明涉及一种在蛋白质水平精确定量检测抗朊病毒药物作用效果的方法。采用的技术方案是：1)酿酒酵母细胞的活化；2)抗朊病毒药物的初筛选：将待测药物、YPD液体培养基以及调试好的酿酒酵母细胞菌悬液，振荡培养1～5天，通过菌落颜色的变化初步判断待测药物的治疗效果；3)使用SDD-AGE/Western blot的方法，定量检测抗朊病毒药物的作用效果；4)用全自动图像分析系统Dolphin-DOC进行图像扫描，分析。本发明可精确地在蛋白质水平通过检测细胞内朊病毒蛋白聚集体的可溶性变化来评估药物的作用效果；通过定量检测朊病毒蛋白聚集体的分子量大小的变化，完成在蛋白质的水平上判断药物对朊病毒的作用大小。
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公开(公告)号：CN101858866A
公开(公告)日：2010-10-13
申请号：CN201010132003.2
申请日：2010-03-25
Applicant: 辽宁大学
Abstract: 本发明涉及一种在活细胞内精确定量检测抗朊病毒药物作用效果的方法。采用的技术方案是：1)将荧光标签GFP基因插在野生型酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae ATCC208719)朊病毒[PSI+]的编码基因SUP35的N和M结构域中间，得到荧光标记[PSI+]朊病毒的[GPSI+]酵母细胞；2)将[GPSI+]酵母细胞的活化；3)通过观察菌落颜色的变化对抗朊病毒药物进行初筛选；4)用荧光漂白后恢复技术FRAP定量检测抗朊病毒药物作用效果。本发明具有方便以及能够在活细胞中精确定量检测药物对朊病毒的治愈作用的优点，为筛选抗朊病毒药物提供一种快捷、准确的评价作用效果的方法。
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公开(公告)号：CN101481728A
公开(公告)日：2009-07-15
申请号：CN200910010218.4
申请日：2009-01-21
Applicant: 辽宁大学
Abstract: 本发明公开了一种快速的利用基因突变酵母细胞筛选抗朊病毒药物的方法。采用的技术方案是：在野生型酿酒酵母的朊病毒PSI+的编码基因SUP35上，插入荧光标签GFP基因，得到荧光标记[PSI+]朊病毒的[GPSI+]酵母细胞；然后经[GPSI+]酵母细胞的活化、[GPSI+]酵母细胞初始OD值的调试、筛选待测药物后，用荧光显微镜实时观察待测药物对[GPSI+]酵母细胞中朊病毒的作用效果。本发明具有快速以及能够在活体中实时定量的观察药物对于朊病毒的治疗作用的优点，为在更大范围内的寻找抗朊病毒的药物奠定了基础。
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