公开(公告)号：CN104101524A

公开(公告)日：2014-10-15

申请号：CN201410318956.6

申请日：2014-07-07

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 王小龙 ,  陈玉林 ,  周光现 ,  牛怡源 ,  师丙波

IPC: G01N1/28 ,  G01N1/34

Abstract: 本发明公开了一种快速提取纯化检测毛样蛋白方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)样品分类，分别剪成小段；(2)0.15％壬基酚聚氧乙烯(9)醚60℃清洗20min，吸干；(3)dd水60℃清洗5min，吸干；(4)二氯甲烷和乙醇洗常温清洗20min，吸干；(5)dd水60℃清洗5min，吸干；(6)0.1M甲醇碱KOH，室温30min，吸干；(7)dd水60℃清洗5min，吸干；(8)磨碎：用水浸湿，液氮研磨；(9)提取：200μL of7M尿素，2M硫脲，50mM Tris，and50mM TCEP，pH4，室温，过夜消化；.(10)纯化步骤。

公开(公告)号：CN106957857A

公开(公告)日：2017-07-18

申请号：CN201610854586.7

申请日：2016-09-23

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 王小龙 ,  陈玉林 ,  蔡蓓 ,  牛怡源 ,  马宝华

IPC: C12N15/85 ,  A01K67/027

CPC classification number: C12N15/85 ,  A01K67/0276 ,  A01K2217/075 ,  A01K2227/102 ,  C07K14/495 ,  C07K14/50 ,  C12N2800/106 ,  C12N2800/80 ,  C12N2810/10

Abstract: 本发明提供了一种利用CRISPR/Cas9系统共同敲除山羊MSTN和FGF5基因的方法。本发明首先获得针对山羊MSTN第二外显子和第三外显子的sgRNA识别区的两段DNA序列，及针对山羊FGF5第一外显子的sgRNA识别区的两段DNA序列，分别设计并合成相应的sgRNA寡核苷酸序列；接着分别构建针对MSTN第二外显子和第三外显子、FGF5第一外显子且含T7启动子的体外转录载体；利用Cas9和sgRNA的体外转录载体获得Cas9 mRNA和sgRNA，可用于生产MSTN和FGF5共同敲除的转基因山羊。

公开(公告)号：CN106957858A

公开(公告)日：2017-07-18

申请号：CN201610854587.1

申请日：2016-09-23

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 陈玉林 ,  王小龙 ,  蔡蓓 ,  牛怡源 ,  马宝华

IPC: C12N15/85 ,  A01K67/027

CPC classification number: C12N15/85 ,  A01K67/0276 ,  A01K2217/075 ,  A01K2227/103 ,  C12N2800/106 ,  C12N2800/80

Abstract: 本发明提供了一种利用CRISPR/Cas9系统共同敲除绵羊MSTN、ASIP、BCO2基因的方法。本发明首先获得针对绵羊MSTN第二外显子和第三外显子的sgRNA识别区的两段DNA序列、针对绵羊ASIP第五外显子的sgRNA识别区的两段DNA序列、针对绵羊BCO2第二外显子的sgRNA识别区的两段DNA序列，分别设计并和成相应的sgRNA寡核苷酸序列；接着分别构建针对绵羊MSTN第二外显子和第三外显子、针对绵羊ASIP第五外显子、针对绵羊BCO2第二外显子，且含T7启动子的saRNA体外转录载体；利用Cas9和sgRNA的体外转录载体通过体外转录获得Cas9 mRNA和sgRNA，通过受精卵注射可用于生产MSTN、ASIP、BCO2共同敲除的转基因绵羊。

公开(公告)号：CN106636212A

公开(公告)日：2017-05-10

申请号：CN201611005082.4

申请日：2016-11-15

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 陈玉林 ,  王小龙 ,  牛怡源 ,  蔡蓓 ,  周世卫

IPC: C12N15/877 ,  A01K67/027

CPC classification number: C12N15/8772 ,  A01K67/0276 ,  A01K2217/075 ,  A01K2227/102 ,  A01K2267/02 ,  C07K14/47 ,  C12N2800/80

Abstract: 本发明公开了一种利用CRISPR/Cas9系统生产GDF9基因编辑山羊的方法。本发明首先获得针对山羊GDF9第二外显子的sgRNA识别区的DNA序列；其次设计靶向DNA序列的sgRNA，构建针对GDF9第二外显子且含T7启动子的sgRNA体外转录载体；最后设计合成ssODN，利用Cas9和sgRNA的体外转录载体获得Cas9 mRNA、sgRNA，通过受精卵注射体外转录载体获得的Cas9 mRNA、sgRNA和合成的ssODN，即可用于生产GDF9基因PV397I点突变的基因编辑山羊。