公开(公告)号：CN104101524A

公开(公告)日：2014-10-15

申请号：CN201410318956.6

申请日：2014-07-07

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 王小龙 ,  陈玉林 ,  周光现 ,  牛怡源 ,  师丙波

IPC: G01N1/28 ,  G01N1/34

Abstract: 本发明公开了一种快速提取纯化检测毛样蛋白方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)样品分类，分别剪成小段；(2)0.15％壬基酚聚氧乙烯(9)醚60℃清洗20min，吸干；(3)dd水60℃清洗5min，吸干；(4)二氯甲烷和乙醇洗常温清洗20min，吸干；(5)dd水60℃清洗5min，吸干；(6)0.1M甲醇碱KOH，室温30min，吸干；(7)dd水60℃清洗5min，吸干；(8)磨碎：用水浸湿，液氮研磨；(9)提取：200μL of7M尿素，2M硫脲，50mM Tris，and50mM TCEP，pH4，室温，过夜消化；.(10)纯化步骤。

公开(公告)号：CN109679923A

公开(公告)日：2019-04-26

申请号：CN201910041468.8

申请日：2019-01-16

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 陈玉林 ,  金妙函 ,  师丙波 ,  蔡蓓 ,  王小龙

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/12 ,  C12N15/85 ,  C12N15/90

CPC classification number: C12N15/907 ,  C07K14/515 ,  C12N15/85 ,  C12N2800/80 ,  C12N2810/10

Abstract: 本发明公开了一种利用CRISPR/Cas9系统生产VEGF164转基因细胞系的方法，步骤如下：构建针对毛囊特异启动子KAP6.1的3’UTR区的同源打靶载体PB-G-H-VEGF164-DsRed；设计并合成针对KAP6.1的3’UTR区的CRISPR/Cas9系统切割位点的sgRNA，将合成的sgRNA克隆入pGL3-U6-sgRNA-PGK-puromycin构成sgRNA转录载体；将同源打靶载体、sgRNA转录载体及Cas9表达载体混合，转染绒山羊胎儿成纤维细胞，经过筛选后获得的阳性绒山羊胎儿成纤维细胞。本发明解决了纯合个体较难获得，基因插入效率较低的问题。