公开(公告)号：CN104031853A

公开(公告)日：2014-09-10

申请号：CN201310429660.7

申请日：2013-09-22

Applicant: 西北农林科技大学 ,  陕西省畜牧技术推广总站

Inventor： 张智英 ,  张志强 ,  辛颖 ,  安宁 ,  张涛 ,  白义春 ,  邵斯旻 ,  张建峰 ,  任充华 ,  李铎 ,  张龙 ,  闫强 ,  林娟 ,  徐华荣 ,  李欣憶 ,  刘中天 ,  梁明福

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/63 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明公开了一种可用于大规模生产的MSTN酵母菌种的构建方法，该方法步骤为：KanMX4基因片段的扩增和pBlue-KanMX4载体的构建；酵母基因同源臂的插入；pBlue-kan-NTS2-5’3'-MSTN整合载体的构建；将MSTN载体整合入酵母基因组；抗性基因KanMX4的敲除。本发明构建了不含有筛选基因的Myostatin整合型酵母菌株，该菌种可以在富集型培养基中生产，安全可靠成本低，不会造成目的基因丢失，适合于大规模生产重组酵母，采用本发明大规模生产的酵母菌株直接饲喂动物，可在动物体内产生高水平MSTN特异性抗体，解除其抑制作用，促进肌肉生长，这对动物生产具有重要意义。

公开(公告)号：CN103146735A

公开(公告)日：2013-06-12

申请号：CN201210580350.0

申请日：2012-12-28

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张智英 ,  张志强 ,  李铎 ,  辛颖 ,  麻丽霞 ,  王昕 ,  张涛 ,  徐华荣

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/66 ,  C40B40/02 ,  C40B50/06 ,  C12N15/85

Abstract: 本发明TALE重复单元四聚体库的构建方法、TALEN表达载体的构建方法及其应用，属于基因工程技术领域。所述四聚体库的构建包括构建TALE单个重复单元、构建TALE单体质粒以及在T4DNA连接酶缓冲液中加入TALE单体质粒，同时加入BsaI内切酶和T4DNA Ligase进行酶切-连接反应得到TALE重复单元四聚体库的过程。TALEN表达载体是基于TALE重复单元四聚体库构建所得。本发明具有通过PCR扩增和酶切-连接过程就可以构建TALE重复序列四聚体质粒库以及基于四聚体质粒库构建得到TALEN表达载体，减少了成本的投入、减化了构建方法的优点。

公开(公告)号：CN103305548A

公开(公告)日：2013-09-18

申请号：CN201310003808.0

申请日：2013-01-06

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张智英 ,  赵蕊 ,  张婷婷 ,  麻丽霞 ,  张优优 ,  李欣憶 ,  张龙 ,  李铎

IPC: C12N15/85 ,  A61K48/00 ,  A61P37/02 ,  A61P31/04 ,  A61P31/12 ,  A61P35/00

Abstract: 本发明涉及一种由口服基因工程发酵酵母介导的小鼠肠道DC细胞表达外源基因和内源基因的方法及应用，属于免疫学和基因工程技术领域。所述基因工程发酵酵母含有真核基因表达载体JMB84-CMV-β-catenin-HA-T2A-GFP-polyA或JMB84-CMV-eGFP-polyA，真核基因表达载体可以整合在酵母基因组或者作为酵母质粒随酵母细胞进行复制。应用该基因工程酵母饲喂6周龄FVB小鼠，5天后分离FVB小鼠肠道DC细胞可检测到目的基因的表达；若饲喂JMB84-CMV-eGFP-polyA载体，口服免疫35天后，能够在小鼠血清中检测到特异性抗体的产生。本发明具有应用基因工程酵母作为功能基因运送载体，靶向调控哺乳动物肠道免疫细胞(树突状细胞)的功能，能够应用于治疗自身免疫疾病和新型口服疫苗开发和生产的优点。