公开(公告)号：CN102181467A

公开(公告)日：2011-09-14

申请号：CN201110041486.X

申请日：2011-02-21

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 陈玉林 ,  白丁平 ,  方堃 ,  杨明明 ,  何晓琳

IPC: C12N15/66 ,  C12N15/85 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了一种能用于生产转基因山羊的piggyBac转座子载体的构建方法，主要步骤包括：①合成一段包含piggyBac转座子发生转座所必需的PB5′端和PB3′端碱基序列，合成时在PB5′端和PB3′端中间预留出多克隆位点，然后将该序列克隆到pBluSKm载体中构建成pBluSKm-PB载体；再将瘤胃特异表达启动子PRD-SPRR II、经密码子偏好性优化的半胱氨酸合成基因cysE和cysM、Neomycin抗性基因和绿色荧光蛋白基因克隆到pBluSKm-PB载体中最终构建成pBluSKm-PB-PRD-cysEM-NEO-EGFP转座子载体。本发明所获得的转座子载体能够满足细胞筛选、倒置荧光显微镜下显微操作和生产转基因山羊等要求。

公开(公告)号：CN102181466B

公开(公告)日：2013-03-20

申请号：CN201110041480.2

申请日：2011-02-21

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 陈玉林 ,  白丁平 ,  方堃 ,  杨明明 ,  何晓琳

IPC: C12N15/66

Abstract: 本发明公开了一种能用于生产转基因羊的piggyBac转座子载体的构建方法，主要步骤包括：合成一段包含piggyBac转座子发生转座所必需的PB5’端和PB3’端碱基序列，合成时在PB5’端和PB3’端中间预留出多克隆位点，然后将该序列克隆到pBluSKm载体中构建成pBluSKm-PB载体；再将Neomycin抗性基因和绿色荧光蛋白基因克隆到pBluSKm-PB载体中最终构建成pBluSKm-PB-NEO-EGFP转座子载体。本发明所获得的转座子载体能够满足细胞筛选、倒置荧光显微镜下显微操作和生产转基因羊等要求。

公开(公告)号：CN102181466A

公开(公告)日：2011-09-14

申请号：CN201110041480.2

申请日：2011-02-21

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 陈玉林 ,  白丁平 ,  方堃 ,  杨明明 ,  何晓琳

IPC: C12N15/66 ,  C12N15/65 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明公开了一种能用于生产转基因羊的piggyBac转座子载体的构建方法，主要步骤包括：①合成一段包含piggyBac转座子发生转座所必需的PB5′端和PB3′端碱基序列，合成时在PB5′端和PB3′端中间预留出多克隆位点，然后将该序列克隆到pBluSKm载体中构建成pBluSKm-PB载体；再将Neomycin抗性基因和绿色荧光蛋白基因克隆到pBluSKm-PB载体中最终构建成pBluSKm-PB-NEO-EGFP转座子载体。本发明所获得的转座子载体能够满足细胞筛选、倒置荧光显微镜下显微操作和生产转基因羊等要求。