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公开(公告)号：CN108165629B
公开(公告)日：2021-05-11
申请号：CN201711165170.5
申请日：2017-11-21
Applicant: 苏州大学附属第一医院
IPC: C12Q1/6886 , C12Q1/6858 , C12Q1/6848
Abstract: 本发明提供了一种DNA点突变定量检测方法，通过PNA探针两次对野生型模板的抑制，极大程度地抑制了野生型模板的扩增，解决了PNA钳制不完全的问题。同时，利用扩增引物Tm值差异和扩增时退火温度控制，使巢式PCR能在单管中进行，增强了扩增强度和扩增特异性。使拷贝数极低的临床样本的扩增成为了可能。最后，通过实时荧光的闭管检测，既实现了实时检测，又避免了样品的交叉污染，还实现了突变的定量。此外，该方法只需要普通实时荧光PCR仪器，且在2h内就能得到检测结果，试剂成本低，可实现对样品的快速、低成本检测。总之，该方法的成功建立，可为临床DNA点突变的检测提供一种高灵敏、高特异、简便快速、无污染和低成本的检测新方法。
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公开(公告)号：CN108070657A
公开(公告)日：2018-05-25
申请号：CN201711164041.4
申请日：2017-11-21
Applicant: 苏州大学附属第一医院
IPC: C12Q1/6886 , C12Q1/6858 , C12Q1/6848
Abstract: 本发明提供了一种DNA点突变定量检测试剂盒，包括如下组分：2条外引物，其脱氧核苷酸序列分别如SEQ ID No.1、2所示，2条内引物，其脱氧核苷酸序列分别如SEQ ID No.3、4所示；1条PNA探针，其脱氧核苷酸序列如SEQ ID No.5所示；1条LAN探针，其脱氧核苷酸序列如SEQ ID No.6所示；1条内标荧光探针，其脱氧核苷酸序列如SEQ ID No.7所示。本发明的试剂盒通过PNA探针两次对野生型模板的抑制，极大程度地抑制了野生型模板的扩增，解决了PNA钳制不完全的问题。
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公开(公告)号：CN108070657B
公开(公告)日：2021-05-11
申请号：CN201711164041.4
申请日：2017-11-21
Applicant: 苏州大学附属第一医院
IPC: C12Q1/6886 , C12Q1/6858 , C12Q1/6848
Abstract: 本发明提供了一种DNA点突变定量检测试剂盒，包括如下组分：2条外引物，其脱氧核苷酸序列分别如SEQ ID No.1、2所示，2条内引物，其脱氧核苷酸序列分别如SEQ ID No.3、4所示；1条PNA探针，其脱氧核苷酸序列如SEQ ID No.5所示；1条LAN探针，其脱氧核苷酸序列如SEQ ID No.6所示；1条内标荧光探针，其脱氧核苷酸序列如SEQ ID No.7所示。本发明的试剂盒通过PNA探针两次对野生型模板的抑制，极大程度地抑制了野生型模板的扩增，解决了PNA钳制不完全的问题。
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公开(公告)号：CN108165629A
公开(公告)日：2018-06-15
申请号：CN201711165170.5
申请日：2017-11-21
Applicant: 苏州大学附属第一医院
IPC: C12Q1/6886 , C12Q1/6858 , C12Q1/6848
Abstract: 本发明提供了一种DNA点突变定量检测方法，通过PNA探针两次对野生型模板的抑制，极大程度地抑制了野生型模板的扩增，解决了PNA钳制不完全的问题。同时，利用扩增引物Tm值差异和扩增时退火温度控制，使巢式PCR能在单管中进行，增强了扩增强度和扩增特异性。使拷贝数极低的临床样本的扩增成为了可能。最后，通过实时荧光的闭管检测，既实现了实时检测，又避免了样品的交叉污染，还实现了突变的定量。此外，该方法只需要普通实时荧光PCR仪器，且在2h内就能得到检测结果，试剂成本低，可实现对样品的快速、低成本检测。总之，该方法的成功建立，可为临床DNA点突变的检测提供一种高灵敏、高特异、简便快速、无污染和低成本的检测新方法。
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