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公开(公告)号：CN114507278B
公开(公告)日：2023-04-25
申请号：CN202210101211.9
申请日：2022-01-27
Applicant: 苏州大学
Abstract: 本发明属于蛋白质合成技术领域，具体涉及一种犹素探针UFM1‑Lys‑TAMRA及其合成方法，该制备方法包括以下步骤，利用犹素激活酶活化犹素C端后原位肼解，制备犹素酰肼；将所述犹素酰肼经原位氧化转化为犹素硫酯；将所述犹素硫酯直接氨解，获得所述犹素探针UFM1‑Lys‑TAMRA。本发明首先运用犹素激活酶UBA5催化的原位活化策略制备犹素酰肼UFM1‑NHNH2，并基于酰肼法将其进一步转化为犹素硫酯UFM1‑Mesna，进而通过直接氨解法获得犹素探针UFM1‑Lys‑TAMRA。具有制备产率高、合成纯度高、操作简易、可大量制备、合成成本低等特点。
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公开(公告)号：CN114456275B
公开(公告)日：2023-05-12
申请号：CN202210102690.6
申请日：2022-01-27
Applicant: 苏州大学
Abstract: 本发明属于蛋白质合成技术领域，涉及一种多位点单泛素修饰组蛋白的合成方法，包括以下步骤，在弱酸缓冲盐条件下，采用交联剂活化泛素突变体，得到活性中间体；所述泛素突变体的C端甘氨酸被半胱氨酸取代，所述交联剂能够与半胱氨酸特异性反应；加入组蛋白突变体，调节pH至偏中性，原位诱发所述活性中间体与所述组蛋白突变体交联，得到所述多位点单泛素修饰组蛋白；所述组蛋白突变体的修饰位点被半胱氨酸取代。本发明以重组蛋白为原料，经位点选择性的正交反应合成结构复杂的目的蛋白，具有操作简单、合成效率高、可大量制备等优点。
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公开(公告)号：CN114507278A
公开(公告)日：2022-05-17
申请号：CN202210101211.9
申请日：2022-01-27
Applicant: 苏州大学
Abstract: 本发明属于蛋白质合成技术领域，具体涉及一种犹素探针UFM1‑Lys‑TAMRA及其合成方法，该制备方法包括以下步骤，利用犹素激活酶活化犹素C端后原位肼解，制备犹素酰肼；将所述犹素酰肼经原位氧化转化为犹素硫酯；将所述犹素硫酯直接氨解，获得所述犹素探针UFM1‑Lys‑TAMRA。本发明首先运用犹素激活酶UBA5催化的原位活化策略制备犹素酰肼UFM1‑NHNH2，并基于酰肼法将其进一步转化为犹素硫酯UFM1‑Mesna，进而通过直接氨解法获得犹素探针UFM1‑Lys‑TAMRA。具有制备产率高、合成纯度高、操作简易、可大量制备、合成成本低等特点。
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公开(公告)号：CN114456275A
公开(公告)日：2022-05-10
申请号：CN202210102690.6
申请日：2022-01-27
Applicant: 苏州大学
Abstract: 本发明属于蛋白质合成技术领域，涉及一种多位点单泛素修饰组蛋白的合成方法，包括以下步骤，在弱酸缓冲盐条件下，采用交联剂活化泛素突变体，得到活性中间体；所述泛素突变体的C端甘氨酸被半胱氨酸取代，所述交联剂能够与半胱氨酸特异性反应；加入组蛋白突变体，调节pH至偏中性，原位诱发所述活性中间体与所述组蛋白突变体交联，得到所述多位点单泛素修饰组蛋白；所述组蛋白突变体的修饰位点被半胱氨酸取代。本发明以重组蛋白为原料，经位点选择性的正交反应合成结构复杂的目的蛋白，具有操作简单、合成效率高、可大量制备等优点。
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