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公开(公告)号：CN111944762A
公开(公告)日：2020-11-17
申请号：CN202010864444.5
申请日：2020-08-25
Applicant: 苏州大学
IPC: C12N5/10 , C12N5/0786 , C12N15/85
Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR-Cas9构建基因编辑巨噬细胞的方法及构建的基因编辑巨噬细胞，属于基因工程技术领域。本发明采用将Cas9质粒与sgRNA分两步电转的方法，一方面通过减少外源基因数量提高转染效率，另一方面构建成功的稳定表达Cas9的巨噬细胞可作为工具细胞进行其他基因的编辑，为后续巨噬细胞的基因编辑奠定基础。此外，本发明的sgRNA是在内含子上进行设计，可将整个外显子切除致使几百甚至上千个碱基丢失，用PCR扩增快速初筛，3h左右即可获得结果，在难以转染的巨噬细胞中大大提高了筛查效率。
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