一种基于数字PCR用于多重靶标核酸检测的方法

    公开(公告)号:CN119432984A

    公开(公告)日:2025-02-14

    申请号:CN202411642624.3

    申请日:2024-11-18

    Abstract: 本发明基于六通道数字PCR并采用非茎环式的通用报告探针和检测探针,在单个反应孔内加入多靶标核酸的引物、检测探针、通用报告探针等试剂进行扩增以及特殊的分析方法。该方法在单孔内仅通过使用具有固定序列的六种不同荧光基团标记的通用报告探针就可将检测靶标数量提高至15种,消除了TaqMan探针法在进行多重靶标核酸检测时不同荧光信号之间的荧光串扰现象,大幅度减少了TaqMan探针法中每一种待检测靶标核酸识别探针上修饰的荧光基团的种类和数量,降低了检测成本。

    一种基于数字PCR检测核酸完整性的方法

    公开(公告)号:CN118166077B

    公开(公告)日:2025-02-11

    申请号:CN202410259603.7

    申请日:2024-03-07

    Abstract: 本发明基于六通道数字PCR检测核酸完整性的方法,采用的试剂盒包括多个含有1‑3个简并碱基的引物和探针,可以对靶标核酸多个相似片段进行识别和扩增。同时,大部分探针的5’端标记了区别于其它探针5’端所标记的荧光染料,经过数字PCR扩增后得到了包含不同荧光染料释放出的不同颜色代表的荧光信号的微滴,之后通过对一个数字PCR反应孔中包含不同荧光信号颜色的微滴进行分析判读以区分完整型和缺陷型核酸,能够提高检测准确性。该方法克服了现有数字PCR技术中荧光标记有限、需要使用两个反应孔进行检测并且检测信息缺失的现象。

    一种自对照介导的基因组结构变异的检测方法

    公开(公告)号:CN110358813A

    公开(公告)日:2019-10-22

    申请号:CN201910669142.X

    申请日:2019-07-24

    Abstract: 本发明涉及一种自对照介导的基因组结构变异的检测方法。本方法利用数字PCR检测平台,在一个PCR扩增体系中加入多条待检基因多种结构变异检测的正向引物、一条自对照正向引物、一条共用反向引物及两条荧光标记的探针。将目标基因组结构变异区段及非结构变异区段同时扩增,并且所扩增的非结构变异区段包含于目标基因组结构变异区段内,即以待检基因自身作为对照,显著减少多引物多扩增所带来的信号干扰,同时无需标准品即可实现转录本拷贝数检测。该方法不仅可以判定基因组结构变异的拷贝数,还可同时检测正常基因的拷贝数以及其基因组结构变异的发生频率,并且使检测结果的精准度较现有技术提高了3倍。

    一种基于数字PCR检测核酸完整性的方法

    公开(公告)号:CN118166077A

    公开(公告)日:2024-06-11

    申请号:CN202410259603.7

    申请日:2024-03-07

    Abstract: 本发明基于六通道数字PCR检测核酸完整性的方法,采用的试剂盒包括多个含有1‑3个简并碱基的引物和探针,可以对靶标核酸多个相似片段进行识别和扩增。同时,大部分探针的5’端标记了区别于其它探针5’端所标记的荧光染料,经过数字PCR扩增后得到了包含不同荧光染料释放出的不同颜色代表的荧光信号的微滴,之后通过对一个数字PCR反应孔中包含不同荧光信号颜色的微滴进行分析判读以区分完整型和缺陷型核酸,能够提高检测准确性。该方法克服了现有数字PCR技术中荧光标记有限、需要使用两个反应孔进行检测并且检测信息缺失的现象。

    一种石蜡切片DNA预处理试剂及方法

    公开(公告)号:CN116773291B

    公开(公告)日:2024-04-19

    申请号:CN202310339734.1

    申请日:2023-03-31

    Abstract: 本发明提供了一种石蜡切片DNA预处理试剂及方法可以显著改善在数字PCR检测时由于石蜡切片DNA存在的多种状态与探针非特异性结合而产生的“雨幕”现象。石蜡切片DNA预处理试剂使用了尿嘧啶DNA糖苷酶、核酸外切酶Ⅰ、核酸外切酶Ⅲ,分别对石蜡切片制作以及后续DNA提取过程中由于紫外线照射、pH值、缺氧和加热过程导致石蜡切片中DNA脱氨化反应使胞嘧啶(C)脱氨后变成尿嘧啶(U)带来的单碱基突变、DNA单链、DNA双链碎片发挥作用。其中,UDG酶可以消化C变异产生的U带来的单碱基突变,核酸外切酶I(EXOI)可以从3’端降解单链DNA的3~5个碱基,核酸外切酶Ⅲ(EXOⅢ)可以从3’端降解存在缺刻的双链DNA的3~5个碱基,同时对三种酶的组合以及预处理的温度和时间进行摸索和确定以改善或消除石蜡切片DNA在数字PCR检测过程中的“雨幕”现象并利于DNA拷贝数的判定。

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