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公开(公告)号：CN116622677B
公开(公告)日：2024-05-14
申请号：CN202310761791.9
申请日：2023-06-27
Applicant: 福建师范大学
Abstract: 本发明公开了一种伯克霍尔德氏菌脂肪酶突变体及其在全细胞生物催化合成甾醇酯中的应用。所述伯克霍尔德氏菌脂肪酶突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其编码基因如SEQ ID NO.2所示。该脂肪酶突变体催化活性较野生型脂肪酶LipA提高了10.24倍。采用溶胶‑凝胶法将该脂肪酶突变体制备成固定化全细胞脂肪酶催化合成甾醇酯，24小时转化率高达87.66%。
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公开(公告)号：CN109022393B
公开(公告)日：2022-01-04
申请号：CN201810898640.7
申请日：2018-08-08
Applicant: 福建师范大学
Abstract: 本发明提供热稳定胆固醇酯酶突变体OPE‑D136P及其制备方法，所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明利用FoldX等软件，结合热稳定胆固醇酯酶突变体自由能的变化值，构建突变体电子文库；利用多种生物信息学软件分析淘汰结构不合理的突变体；从结构合理的突变体中，筛选具有脯氨酸效应的突变体，进一步分析：突变氨基酸残基的相对溶剂表面积（大于50%）和突变位点氨基酸残基在370K和300K下的RMSF值的差值（大于零）。利用上述方法构建筛选热稳定性胆固醇酯酶突变体，阳性突变体频率高达66.7%，有效降低筛选工作量；获得的突变体OPE‑D136P的失活半衰期较野生型OPE延长3.6倍。
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公开(公告)号：CN109022393A
公开(公告)日：2018-12-18
申请号：CN201810898640.7
申请日：2018-08-08
Applicant: 福建师范大学
CPC classification number: C12N9/18 , C12N15/815 , C12Y301/01013
Abstract: 本发明提供热稳定胆固醇酯酶突变体OPE‑D136P及其制备方法，所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明利用FoldX等软件，结合热稳定胆固醇酯酶突变体自由能的变化值，构建突变体电子文库；利用多种生物信息学软件分析淘汰结构不合理的突变体；从结构合理的突变体中，筛选具有脯氨酸效应的突变体，进一步分析：突变氨基酸残基的相对溶剂表面积（大于50%）和突变位点氨基酸残基在370K和300K下的RMSF值的差值（大于零）。利用上述方法构建筛选热稳定性胆固醇酯酶突变体，阳性突变体频率高达66.7%，有效降低筛选工作量；获得的突变体OPE‑D136P的失活半衰期较野生型OPE延长3.6倍。
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公开(公告)号：CN104651344A
公开(公告)日：2015-05-27
申请号：CN201510109888.7
申请日：2015-03-13
Applicant: 福建师范大学
Abstract: 本发明涉及酶制剂制备技术，具体涉及一种过水解酶的固定化酶制剂的制备方法。其技术方案是：诱导大肠杆菌重组菌株表达过水解酶后，经裂解、纯化、浓缩得到浓度为10～18g/L的过水解酶蛋白；将过水解酶蛋白与牛血清白蛋白混合，加入乙二醇二甲醚溶液，沉淀后向上述沉淀体系中进一步加入戊二醛，摇床震荡获得过水解酶的交联酶聚集体；将交联酶聚集体与聚乙烯醇混合后立即将其滴加到硝酸钠溶液中获得片状过水解酶固定化酶制剂，冻干保存。本发明制备方法简单方便，价格低廉，具备市场竞争优势；制备的固定化酶制剂，对印染废水进行脱色处理，在脱色率超过80%的情况下可以循环利用6次以上，具有良好的应用效果。
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公开(公告)号：CN109182299B
公开(公告)日：2021-12-31
申请号：CN201811278839.6
申请日：2018-10-30
Applicant: 福建师范大学
Abstract: 本发明提供了耐受过氧化氢的枯草芽胞杆菌脂肪酶突变体及其制备方法，脂肪酶突变体多肽链的氨基酸序列及其基因序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。本发明还包含了所含的脂肪酶突变基因的重组质粒及转化子。本发明利用ESI‑Q‑TOF‑MS分析脂肪酶经过氧化氢处理前后分子量的变化，确定被氧化氨基酸残基类型；进而利用丙氨酸扫描法确定被氧化氨基酸残基的位置；最后，利用定点突变技术和叠加突变技术，构建并筛选出对过氧化氢有良好耐受能力的脂肪酶突变体。利用本方法构建、筛选的脂肪酶突变体，阳性突变率为75%；其中LipA‑Trp42Ala/Met134Glu耐受过氧化氢的C50提高了10倍。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108977419B
公开(公告)日：2021-12-31
申请号：CN201810897089.4
申请日：2018-08-08
Applicant: 福建师范大学
Abstract: 本发明提供热稳定胆固醇酯酶突变体OPE‑S109P/S271P及其制备方法，所述突变体序列如SEQ ID NO.1所示。本发明利用软件，结合突变体自由能的变化值，构建突变体电子文库；从结构合理的突变体中，筛选出突变位点位于β‑转角的突变体，进行分析：组成β‑转角氨基酸残基z_B‑factor的平均值大于零；组成β‑转角氨基酸残基z_RMSF的平均值大于零；突变位点所的β‑转角柔性值大于1；与热稳定蛋白β‑转角氨基酸偏好性相同。满足上述两个条件的突变体组成微型突变文库。利用上述方法构建所述突变体，阳性突变体频率为33.3%，有效降低筛选工作量；获得突变体的失活半衰期较野生型OPE延长了3.6倍。
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公开(公告)号：CN109022392A
公开(公告)日：2018-12-18
申请号：CN201810897088.X
申请日：2018-08-08
Applicant: 福建师范大学
CPC classification number: C12N9/18 , C12N15/815 , C12Y301/01013
Abstract: 本发明提供热稳定胆固醇酯酶突变体OPE‑A355E/T383E及其制备方法，所述突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明利用FoldX等软件，结合热稳定胆固醇酯酶突变体自由能的变化值，构建突变体电子文库；利用YASARA等软件分析淘汰结构不合理的突变体；对具有盐桥效应的突变体，利用生物信息学软件分析其相对溶剂表面积、形成盐桥的氨基酸残基之间的间隔距离等，筛选符合要求的突变体，组成微型突变电子文库。利用定点突变技术，实验评估、验证突变效应。利用上述方法构建热稳定性胆固醇酯酶突变体，阳性突变体频率高达52.4%，有效降低筛选工作量；获得的突变体的半衰期延长10.5倍。
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公开(公告)号：CN115806952A
公开(公告)日：2023-03-17
申请号：CN202211116546.4
申请日：2022-09-14
Applicant: 福建师范大学
Abstract: 本发明涉及生物技术和绿色化工领域，具体公开了一种可与葡萄糖氧化酶高效偶联的耻垢分枝杆菌酰基转移酶（MsAcT）突变体及其制备方法和应用。所述MsAcT突变体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，其编码基因的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明制备的MsAcT突变体对氧化氢的亲和力较野生型MsAcT提高了50倍，可高效催化芳樟醇的环氧化，产业化前景良好。
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公开(公告)号：CN109182299A
公开(公告)日：2019-01-11
申请号：CN201811278839.6
申请日：2018-10-30
Applicant: 福建师范大学
Abstract: 本发明提供了耐受过氧化氢的枯草芽胞杆菌脂肪酶突变体及其制备方法，脂肪酶突变体多肽链的氨基酸序列及其基因序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。本发明还包含了所含的脂肪酶突变基因的重组质粒及转化子。本发明利用ESI-Q-TOF-MS分析脂肪酶经过氧化氢处理前后分子量的变化，确定被氧化氨基酸残基类型；进而利用丙氨酸扫描法确定被氧化氨基酸残基的位置；最后，利用定点突变技术和叠加突变技术，构建并筛选出对过氧化氢有良好耐受能力的脂肪酶突变体。利用本方法构建、筛选的脂肪酶突变体，阳性突变率为75%；其中LipA-Trp42Ala/Met134Glu耐受过氧化氢的C50提高了10倍。
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公开(公告)号：CN108977419A
公开(公告)日：2018-12-11
申请号：CN201810897089.4
申请日：2018-08-08
Applicant: 福建师范大学
Abstract: 本发明提供热稳定胆固醇酯酶突变体OPE-S109P/S271P及其制备方法，所述突变体序列如SEQ ID NO.1所示。本发明利用软件，结合突变体自由能的变化值，构建突变体电子文库；从结构合理的突变体中，筛选出突变位点位于β-转角的突变体，进行分析：组成β-转角氨基酸残基z_B-factor的平均值大于零；组成β-转角氨基酸残基z_RMSF的平均值大于零；突变位点所的β-转角柔性值大于1；与热稳定蛋白β-转角氨基酸偏好性相同。满足上述两个条件的突变体组成微型突变文库。利用上述方法构建所述突变体，阳性突变体频率为33.3%，有效降低筛选工作量；获得突变体的失活半衰期较野生型OPE延长了3.6倍。
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