公开(公告)号：CN102418151A

公开(公告)日：2012-04-18

申请号：CN201110277886.0

申请日：2011-09-19

Applicant: 福建农林大学

Inventor： 方长旬 ,  林文雄 ,  黄力坤 ,  许铁城 ,  林瑞余

IPC: C40B50/06 ,  C40B40/08 ,  C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/10 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提供了一种土壤微生物cDNA文库的构建方法，本发明的构建方法先将总RNA逆转录成单链的cDNA，单链cDNA的5’端经去磷酸化后与5’端磷酸化修饰的接头1连接，再将5’端连有接头的cDNA进行磷酸化反应，反应后的cDNA的3’端与接头2连接，获得5’、3’端分别连接有接头的cDNA，采用与接头部分序列互补的寡核苷酸作为引物对cDNA进行扩增，从而获得土壤微生物的双链cDNA，将此双链cDNA与克隆载体pMD-18T连接后转化大肠杆菌感受态细胞，最终获得土壤微生物的cDNA文库。本发明构建的土壤微生物cDNA文库库容量较大，可以用来筛选感兴趣的目的基因，以及后续的基因、蛋白互作分析。

公开(公告)号：CN102418151B

公开(公告)日：2013-04-17

申请号：CN201110277886.0

申请日：2011-09-19

Applicant: 福建农林大学

Inventor： 方长旬 ,  林文雄 ,  黄力坤 ,  许铁城 ,  林瑞余

IPC: C40B50/06 ,  C40B40/08 ,  C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N15/10 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提供了一种土壤微生物cDNA文库的构建方法，本发明的构建方法先将总RNA逆转录成单链的cDNA，单链cDNA的5’端经去磷酸化后与5’端磷酸化修饰的接头1连接，再将5’端连有接头的cDNA进行磷酸化反应，反应后的cDNA的3’端与接头2连接，获得5’、3’端分别连接有接头的cDNA，采用与接头部分序列互补的寡核苷酸作为引物对cDNA进行扩增，从而获得土壤微生物的双链cDNA，将此双链cDNA与克隆载体pMD-18T连接后转化大肠杆菌感受态细胞，最终获得土壤微生物的cDNA文库。本发明构建的土壤微生物cDNA文库库容量较大，可以用来筛选感兴趣的目的基因，以及后续的基因、蛋白互作分析。

公开(公告)号：CN101974513B

公开(公告)日：2012-05-23

申请号：CN201010548527.X

申请日：2010-11-18

Applicant: 福建农林大学

Inventor： 方长旬 ,  林文雄 ,  王清水 ,  余彦 ,  黄力坤 ,  林瑞余

IPC: C12N15/10

Abstract: 本发明提供一种有效提取作物根际土壤微生物基因组DNA和总RNA的方法，包括将土壤样品先用硫酸铝去除腐殖质等严重干扰核酸提取的杂质，进一步用玻璃珠破碎土壤微生物细胞，再加入SDS及LiCl溶液裂解细胞、游离核酸，加入酚、氯仿和异戊醇混合物萃取后，萃取液用异丙醇及醋酸钠沉淀，最终获得土壤微生物宏基因组DNA和总RNA。本方法适用于不同地域土壤DNA和总RNA的提取，建立了一种操作流程的简易，制备样品纯度较高的提取技术，能够为土壤宏基因组学研究提供重要基础。

公开(公告)号：CN101974513A

公开(公告)日：2011-02-16

申请号：CN201010548527.X

申请日：2010-11-18

Applicant: 福建农林大学

Inventor： 方长旬 ,  林文雄 ,  王清水 ,  余彦 ,  黄力坤 ,  林瑞余

IPC: C12N15/10

Abstract: 本发明提供一种有效提取作物根际土壤微生物基因组DNA和总RNA的方法，包括将土壤样品先用硫酸铝去除腐殖质等严重干扰核酸提取的杂质，进一步用玻璃珠破碎土壤微生物细胞，再加入SDS及LiCl溶液裂解细胞、游离核酸，加入酚、氯仿和异戊醇混合物萃取后，萃取液用异丙醇及醋酸钠沉淀，最终获得土壤微生物宏基因组DNA和总RNA。本方法适用于不同地域土壤DNA和总RNA的提取，建立了一种操作流程的简易，制备样品纯度较高的提取技术，能够为土壤宏基因组学研究提供重要基础。