公开(公告)号：CN109486856A

公开(公告)日：2019-03-19

申请号：CN201811459776.4

申请日：2018-11-30

Applicant: 福建农林大学

Inventor： 顾连峰 ,  王慧慧 ,  王永生 ,  高宇帮 ,  席飞虎 ,  刘旭庆 ,  王汇源 ,  张泽宇 ,  张航晓 ,  赵良真

IPC: C12N15/82

Abstract: 本发明名公开了一种毛竹原生质体环状RNA过表达体系构建方法及应用，属于基因工程技术领域。该体系构建环状RNA过表达载体并将其转化到毛竹的原生质体中。其构建方法为：高保真Taq酶扩增环状RNA宿主基因、以pUC19-35s-sGFP为终载体，使用Gateway方法构建环状RNA过表达重组质粒；大量提取重组质粒并在PEG介导下转化到毛竹原生质体中，研究环状RNA过表达对其宿主基因在转录和转录后水平的影响。

公开(公告)号：CN111705119A

公开(公告)日：2020-09-25

申请号：CN202010640832.5

申请日：2020-07-06

Applicant: 福建农林大学

Inventor： 顾连峰 ,  王慧慧 ,  王永生 ,  韩茜妹 ,  魏文桃 ,  席飞虎 ,  王汇源

IPC: C12Q1/6869

Abstract: 本发明公开了检测毛竹环状RNA表观遗传修饰的方法，属于分子生物学领域。目前常用的RNA修饰检测方法，一般采用特异性RNA修饰的抗体，进行免疫沉淀，结合高通量测序来识别RNA修饰位点。而使用本方法首先纯化得到环状RNA，将环状RNA打断并3'端去磷酸化，基于ONT平台直接对RNA进行测序，即可获得环状RNA的多种表观修饰信息，如m6A、m5C，m1A等。本发明首次提出了避免PCR扩增，直接从单碱基精度上检测环状RNA表观修饰位点的新型方法，克服了传统方法的繁琐流程与高额的抗体成本，这不仅丰富了检测环状RNA中表观修饰方法的多样性，也为探究环状RNA的结构和功能提供了新的思路。

公开(公告)号：CN110283895A

公开(公告)日：2019-09-27

申请号：CN201910642659.X

申请日：2019-07-16

Applicant: 福建农林大学

Inventor： 王慧慧 ,  王永生 ,  王汇源 ,  席飞虎 ,  韩茜妹 ,  顾连峰

IPC: C12Q1/6869

Abstract: 本发明公开了基于二代Illumina测序平台的高效纯化与识别环状RNA的方法，属于分子生物学领域。使用本方法纯化得到的环状RNA测序文库，可以大大提高不相关线性RNA的去除效率，富集得到高纯度的环状RNA。基于基因组注释，构建环状RNA的虚拟数据集。将测序数据的reads进行搜库比对，识别到的环状RNA种类远高于常规方法。这对于研究环状RNA的内部结构和揭示其功能具有重要意义。

公开(公告)号：CN109486856B

公开(公告)日：2021-11-02

申请号：CN201811459776.4

申请日：2018-11-30

Applicant: 福建农林大学

Inventor： 顾连峰 ,  王慧慧 ,  王永生 ,  高宇帮 ,  席飞虎 ,  刘旭庆 ,  王汇源 ,  张泽宇 ,  张航晓 ,  赵良真

IPC: C12N15/82

Abstract: 本发明名公开了一种毛竹原生质体环状RNA过表达体系构建方法及应用，属于基因工程技术领域。该体系构建环状RNA过表达载体并将其转化到毛竹的原生质体中。其构建方法为：高保真Taq酶扩增环状RNA宿主基因、以pUC19‑35s‑sGFP为终载体，使用Gateway方法构建环状RNA过表达重组质粒；大量提取重组质粒并在PEG介导下转化到毛竹原生质体中，研究环状RNA过表达对其宿主基因在转录和转录后水平的影响。