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公开(公告)号：CN115894661A
公开(公告)日：2023-04-04
申请号：CN202210959941.2
申请日：2022-08-11
Applicant: 电子科技大学
Abstract: 本发明提供了一种抗菌肽及其应用，涉及生物抗菌技术领域。本申请中，基于动植物个体中直接提取的草鱼白细胞介素21序列进行修饰，得到抗菌肽，不仅原料来源更加科学广泛、缩短了制造周期、降低了制造成本、提高了产出率，还针对天然抗菌肽存在的生物活性较低、稳定性差的缺陷对草鱼白细胞介素21序列进行改造，通过对其结构进行优化，增加它的生物活性与稳定性，从而提高其抗菌能力及应用价值，使得抗菌肽逐步代替抗生素用于治疗鱼类疾病，这符合环保与无公害养殖潮流，具有重要的现实和战略意义。
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公开(公告)号：CN114958742B
公开(公告)日：2024-01-26
申请号：CN202210562961.6
申请日：2022-05-23
Applicant: 电子科技大学
IPC: C12N5/0786
Abstract: 本发明提供了一种分离草鱼脾脏巨噬细胞的方法，所述方法包括：取出草鱼的脾脏组织，并对所述脾脏组织进行清洗；将清洗之后的脾脏组织浸泡于样本稀释液中并对其进行研磨得到组织匀浆悬液；将所述组织匀浆悬液添加到消化液中，添加后进行震荡消化，得到消化产物；对所述消化产物进行过滤和离心处理，得到第一产物，对所述第一产物进行计数点板操作后进行培养得到所述草鱼的脾脏巨噬细胞。通过本发明的方法分离得到的鱼类脾脏巨噬细胞具有数目多、细胞状态良好和成功率高的优点。(56)对比文件Satoshi Fujiyama等.Identification andisolation of splenic tissue-residentmacrophage sub-populations by flowcytometry《.International Immunology》.2019,摘要，第52页右栏第2段，第55页右栏第2段-第56页左栏第1段，图1B.闫峰等.人脾脏巨噬细胞的分离与纯化《.西安交通大学学报（医学版）》》.2004,第513-516页.
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公开(公告)号：CN112159466A
公开(公告)日：2021-01-01
申请号：CN202011072376.5
申请日：2020-10-09
Applicant: 电子科技大学
Abstract: 本发明公开了一种重组草鱼白介素‑6活性蛋白的制备方法，包括以下步骤：S1.培养含表达质粒pET‑30/gcIL‑6的BL21(DE3)大肠杆菌，诱导蛋白表达15‑25h；S2.收集发酵液，离心，弃上清，重悬菌体，冻融10‑20h；S3.向菌液中加苯甲基磺酰氟溶液，超声处理，然后离心，收集沉淀即为包涵体；S4.用洗涤缓冲液对包涵体进行振荡洗涤，然后离心；S5.用1％Triton X‑114振荡洗涤包涵体，离心；S6.用3M尿素振荡洗涤包涵体，离心；S7.用含6M盐酸胍的结合缓冲液溶解包涵体，离心溶解5‑15min，留上清；S8.对蛋白进行纯化；S9.将纯化的蛋白滴加至折叠缓冲液中，然后搅拌10‑20h，再过滤，离心，得到蛋白溶液；S10.将蛋白溶液置于磷酸盐缓冲液中，离心，即得。通过本发明方法能够获得大量生物学活性高的重组草鱼IL‑6蛋白。
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公开(公告)号：CN108822202A
公开(公告)日：2018-11-16
申请号：CN201810124904.3
申请日：2018-02-07
Applicant: 电子科技大学
Abstract: 本发明涉及一种草鱼白细胞介素21重组蛋白及其制备方法，本发明包括：同源克隆技术从草鱼鳃组织中克隆获得草鱼白细胞介素21蛋白的编码序列；构造蛋白成熟肽重组表达质粒，将其转化到细菌中，克隆得到工程菌株；对得到的工程菌株，通过诱导剂进行诱导表达后，经分离纯化变复性处理获得有活性的重组草鱼白介素21蛋白。本发明在获得高纯度的重组蛋白时减少了亲和层析步骤，极大地简化了获取目的蛋白的流程和成本，且纯度高达95%；具有较高的活性蛋白获得率；操作简便易行，生产成本低。
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公开(公告)号：CN102998457A
公开(公告)日：2013-03-27
申请号：CN201210312755.6
申请日：2012-08-29
Applicant: 电子科技大学
IPC: G01N33/68 , G01N33/543
Abstract: 本发明涉及草鱼肿瘤坏死因子alpha的竞争抑制酶联免疫检测方法，包括如下步骤：步骤1：确定包被抗原的浓度和多克隆抗体的最适稀释倍数；步骤2：建立竞争抑制酶联免疫检测方法，包被草鱼肿瘤坏死因子alpha蛋白的酶标板得到固定于酶标板上的抗原；将酶标抗体与抗原混合液混合后与固定于酶标板上的抗原竞争结合；洗涤酶标板以及对底物显色；对酶标板的孔进行读数得到每个孔的吸光值，根据读取的吸光值分别计算标准品抗原和待测样品的抑制率从而根据该抑制率计算待测样品的浓度。本发明的有益效果是：为检测草鱼中肿瘤坏死因子alpha的蛋白表达水平提供了快速高效的检测手段，该法稳定可靠，且成本较低。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN115894661B
公开(公告)日：2024-05-28
申请号：CN202210959941.2
申请日：2022-08-11
Applicant: 电子科技大学
Abstract: 本发明提供了一种抗菌肽及其应用，涉及生物抗菌技术领域。本申请中，基于动植物个体中直接提取的草鱼白细胞介素21序列进行修饰，得到抗菌肽，不仅原料来源更加科学广泛、缩短了制造周期、降低了制造成本、提高了产出率，还针对天然抗菌肽存在的生物活性较低、稳定性差的缺陷对草鱼白细胞介素21序列进行改造，通过对其结构进行优化，增加它的生物活性与稳定性，从而提高其抗菌能力及应用价值，使得抗菌肽逐步代替抗生素用于治疗鱼类疾病，这符合环保与无公害养殖潮流，具有重要的现实和战略意义。
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公开(公告)号：CN112442504A
公开(公告)日：2021-03-05
申请号：CN202011432286.2
申请日：2020-12-10
Applicant: 电子科技大学
Abstract: 本发明公开了一种重组草鱼白介素‑12活性蛋白的制备方法，包括以下步骤：将p35核酸序列先构建到载体上，再将p40核酸序列插入到(GGGGS)3linker前，获得能够完整表达单链IL‑12蛋白的质粒；点种CHO/dhFr‑细胞并转染S3所得质粒，然后采用MTX连续梯度加压筛选，获得单克隆细胞；培养单克隆细胞，收集细胞培养基，采用蛋白质免疫印迹检测分泌到培养基中的蛋白，筛得高表达IL‑12的细胞株；对高表达IL‑12的细胞株进行悬浮驯化培养，收集细胞培养基，过滤，纯化，即得。本发明利用柔性氨基酸链连接草鱼p40和p35两个亚基以获得稳定的重组草鱼IL‑12蛋白，便于深入研究其生物学功能及后续应用于生产实践。
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公开(公告)号：CN104277119B
公开(公告)日：2017-03-15
申请号：CN201410492340.0
申请日：2014-09-23
Applicant: 电子科技大学
IPC: C07K19/00 , C12N15/62 , C12N15/12 , C12N15/81 , C12N1/19 , C07K16/18 , A61K38/17 , A61P29/00 , C12R1/84
Abstract: 本发明公开了一种重组草鱼IL-1β拮抗蛋白及相关技术。针对现有技术尚未公开过具有拮抗草鱼白细胞介素1β活性的功能蛋白的相关技术，本发明首先提供了一种重组草鱼IL-1β拮抗蛋白。该重组蛋白来自于通过构建表达重组草鱼IL-1β拮抗蛋白成熟肽的表达质粒并将其转入毕赤酵母菌中，筛选出可稳定表达草鱼IL-1β拮抗蛋白的转化子，并通过诱导表达以及亲和层析和分子筛层析得到。试验证明该重组蛋白是草鱼IL-1β活性抑制蛋白。本发明还提供了编码上述重组蛋白的基因，编码草鱼IL-1β拮抗蛋白的基因全序列，编码草鱼IL-1β拮抗蛋白成熟肽的基因。本发明还公开了重组草鱼IL-1β拮抗蛋白的制备方法，同时也提供了该重组蛋白在鱼类抗炎药物、免疫检测中的应用及对应产品。
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公开(公告)号：CN108822202B
公开(公告)日：2021-11-30
申请号：CN201810124904.3
申请日：2018-02-07
Applicant: 电子科技大学
Abstract: 本发明涉及一种草鱼白细胞介素21重组蛋白及其制备方法，本发明包括：同源克隆技术从草鱼鳃组织中克隆获得草鱼白细胞介素21蛋白的编码序列；构造蛋白成熟肽重组表达质粒，将其转化到细菌中，克隆得到工程菌株；对得到的工程菌株，通过诱导剂进行诱导表达后，经分离纯化变复性处理获得有活性的重组草鱼白介素21蛋白。本发明在获得高纯度的重组蛋白时减少了亲和层析步骤，极大地简化了获取目的蛋白的流程和成本，且纯度高达95%；具有较高的活性蛋白获得率；操作简便易行，生产成本低。
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公开(公告)号：CN108893474B
公开(公告)日：2021-11-16
申请号：CN201810125614.0
申请日：2018-02-07
Applicant: 电子科技大学
IPC: C12N15/12 , C12N15/85 , C12N15/66 , C12Q1/02 , C07K14/705
Abstract: 本发明涉及草鱼细胞间粘附分子基因的分离和鉴定，包括以下步骤：克隆得到草鱼ICAM‑1编码序列；提取草鱼ICAM‑1活性蛋白的重组表达质粒；ICAM‑1蛋白在COS‑7细胞中的表达；草鱼血淋巴细胞的分离及染色；草鱼血淋巴细胞的粘附实验。本发明的技术特点是：ICAM‑1对淋巴细胞跨内皮细胞作用是必需的，该基因分离鉴定可用于鱼类免疫学机制研究；血清中存在着可溶性的ICAM‑1（sICAM‑1），它来自于蛋白酶切割膜形式的ICAM‑1；在临床上，检测血清中的sICAM‑1水平可用于辅助诊断鱼病。
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