靶核酸序列的扩增方法、使用该方法的突变检测方法、以及用于该方法的试剂

    公开(公告)号:CN102076850B

    公开(公告)日:2014-05-07

    申请号:CN200980125546.7

    申请日:2009-07-02

    Abstract: 本发明提供一种能够在1个反应体系中灵敏度和可靠性优异地进行突变检测的突变检测方法。使用引物(Xmt)和(Xwt),以与作为检测目标的碱基为正常型的靶核酸序列的扩增效率相比更高的扩增效率,来扩增作为检测目标的碱基为突变型的靶核酸序列。(Xmt)为与模板核酸中包含突变型碱基的区域互补、且3’区域具有与突变型碱基互补的碱基的引物,(Xwt)为与模板核酸中包含正常型碱基的区域互补、且3’区域具有与正常型碱基互补的碱基的引物。(Xmt)对突变型模板核酸的扩增效率优选高于(Xwt)对正常型模板核酸的扩增效率。并且,对显示所得到的扩增产物与探针的杂交产物的熔解状态的信号值进行测定,由与温度变化相伴的信号值变动来确定目标碱基位点有无突变。

    abl基因多态性的检测用探针和其用途

    公开(公告)号:CN102329857A

    公开(公告)日:2012-01-25

    申请号:CN201110201116.8

    申请日:2011-07-12

    Inventor: 细见敏也

    CPC classification number: C12Q1/6886 C12Q2600/106 C12Q2600/156

    Abstract: 本发明涉及医疗和诊断领域。具体而言,本发明涉及abl基因多态性的检测用探针和其用途。本发明公开了一种多态性检测用探针,其特征在于,其为用于检测abl基因的多态性的探针,由选自P1~P9的至少1种荧光标记寡核苷酸构成。本发明还公开了利用本发明探针的检测方法和试剂盒。本发明的探针特异性高,具有优异的检测灵敏度。采用本发明探针的检测方法步骤简单,容易自动化。

    使用了微粒的微生物和核酸的回收方法以及该方法中使用的试剂盒

    公开(公告)号:CN101180392A

    公开(公告)日:2008-05-14

    申请号:CN200680017523.0

    申请日:2006-05-19

    CPC classification number: Y02A50/451

    Abstract: 本发明提供简单且回收率优异的微生物和核酸的回收方法。本发明的微生物回收方法的特征在于,其包括使微粒与试样相接触以使所述试样中的微生物吸附在微粒上的微生物吸附工序,其中所述微粒的粒径为6μm以下、且其比表面积为50m2/g以下。另外,本发明的核酸回收方法的特征在于,其包括使试样中的微生物吸附在微粒上的微生物吸附工序、和使核酸从所述吸附在微粒上的微生物中溶出的核酸溶出工序,其中所述微生物吸附工序为本发明的微生物回收方法。根据本发明的回收方法,可以简单且高效地回收微生物和核酸。所述微粒优选为磁性二氧化硅粒子。

    基因丰度的测定方法
    5.
    发明公开

    公开(公告)号:CN104024433A

    公开(公告)日:2014-09-03

    申请号:CN201280053730.7

    申请日:2012-10-29

    CPC classification number: C12Q1/6851 C12Q2545/101 C12Q2527/107 C12Q2537/143

    Abstract: 一种基因的丰度的测定方法,包括:在一个反应液中,使用第二引物和包括至少两种第一引物的第一引物组对编码至少两个基因的核酸进行核酸扩增,其中,所述至少两个基因在对象样品中的核酸中的基因丰度有可能不同,所述至少两种第一引物能够将单一的额外碱基序列导入扩增产物中且分别对应于所述至少两个基因,所述第二引物用于扩增包括所述单一的额外碱基序列的核酸,并获得包含所述单一的额外碱基序列且分别对应于所述至少两个基因的至少两种扩增产物;以及检测基于所述至少两种扩增产物的丰度的各自的信号,基于该信号测定出所述至少两个基因的丰度。

    核酸的扩增检测方法以及试剂盒

    公开(公告)号:CN102876661A

    公开(公告)日:2013-01-16

    申请号:CN201210244767.X

    申请日:2012-07-12

    CPC classification number: C12Q1/686 C12Q2521/101 C12Q2521/107

    Abstract: 本发明涉及核酸的扩增检测方法以及试剂盒。具体地,本发明提供了一种对试样中所含的核酸进行扩增的方法,其中,该方法包括:(a)将用于对该核酸的任意区域进行扩增的引物、聚合酶、以及作为核酸扩增底物的核苷酸,与含有该核酸的试样混合的工序;以及(b)利用聚合酶反应对该区域进行扩增的工序。其中,该聚合酶具有由序列编号1构成的氨基酸序列或者与序列编号1同源的氨基酸序列,对应于该氨基酸序列的651位的氨基酸残基被谷氨酸取代。

    靶序列的扩增方法、多态性检测方法以及其中使用的试剂

    公开(公告)号:CN102471771B

    公开(公告)日:2016-01-20

    申请号:CN201180003098.0

    申请日:2011-01-21

    Inventor: 细见敏也

    CPC classification number: C12Q1/6858 C12Q2527/107 C12Q2535/125 C12Q2525/161

    Abstract: 本发明的目的在于提供抑制由于引物的错误退火而造成的扩增的扩增方法。在含有显示多态性的靶位点的靶序列的扩增中,使用引物X1和X2。X1为如下引物:具有序列A1’和序列E1,A1’为与上述模板核酸中的部分序列A1互补的序列,其3’区域具有与A1的5’区域中的上述靶位点的第1碱基x1互补的碱基x1’,E1为与和上述模板核酸中A1的3’末端邻接的部分序列B1非互补的序列、结合在A1’的5’末端。X2为如下引物:具有序列A2’,A2’为与上述模板核酸中的部分序列A2互补的序列,其3’区域具有与A2的5’区域的上述靶位点的第2碱基x2互补的碱基x2’。X1和X2均在3’区域具有与靶位点互补的碱基。利用这样的引物,在仅靶位点为第1碱基x1的模板的情况下,能够防止具有第2碱基x2的靶序列的误扩增。由此,能够抑制第2碱基x2的多态性的假阳性。

    核酸的扩增检测方法以及试剂盒

    公开(公告)号:CN102876661B

    公开(公告)日:2015-10-07

    申请号:CN201210244767.X

    申请日:2012-07-12

    CPC classification number: C12Q1/686 C12Q2521/101 C12Q2521/107

    Abstract: 本发明涉及核酸的扩增检测方法以及试剂盒。具体地,本发明提供了一种对试样中所含的核酸进行扩增的方法,其中,该方法包括:(a)将用于对该核酸的任意区域进行扩增的引物、聚合酶、以及作为核酸扩增底物的核苷酸,与含有该核酸的试样混合的工序;以及(b)利用聚合酶反应对该区域进行扩增的工序。其中,该聚合酶具有由序列编号1构成的氨基酸序列或者与序列编号1同源的氨基酸序列,对应于该氨基酸序列的651位的氨基酸残基被谷氨酸取代。

    NPM1基因的exon12突变检测用探针及其应用

    公开(公告)号:CN102758007A

    公开(公告)日:2012-10-31

    申请号:CN201210136861.3

    申请日:2012-04-28

    Inventor: 细见敏也

    CPC classification number: C12Q1/6886 C12Q2600/156

    Abstract: NPM1基因的exon12突变检测用探针,其特征在于该探针为由选自下述的P5和P5’中的至少一种荧光标记的寡核苷酸构成的多态性检测用探针。(P5)寡核苷酸:具有与序列编号2所示的碱基序列中的、含有编号145~156的碱基的12~50碱基长的碱基序列互补的序列或者与其同源的序列,并且与编号145的碱基对应的碱基为胞嘧啶并用荧光染料标记;以及(P5’)寡核苷酸:具有与序列编号2所示的碱基序列中的、含有编号145~156的碱基的12~50碱基长的碱基序列在严谨条件下杂交的碱基序列,并且与编号145的碱基对应的碱基为胞嘧啶并用荧光染料标记。

    靶序列的扩增方法、多态性检测方法以及其中使用的试剂

    公开(公告)号:CN102471771A

    公开(公告)日:2012-05-23

    申请号:CN201180003098.0

    申请日:2011-01-21

    Inventor: 细见敏也

    CPC classification number: C12Q1/6858 C12Q2527/107 C12Q2535/125 C12Q2525/161

    Abstract: 本发明的目的在于提供抑制由于引物的错误退火而造成的扩增的扩增方法。在含有显示多态性的靶位点的靶序列的扩增中,使用引物X1和X2。X1为如下引物:具有序列A1’和序列E1,A1’为与上述模板核酸中的部分序列A1互补的序列,其3’区域具有与A1的5’区域中的上述靶位点的第1碱基x1互补的碱基x1’,E1为与和上述模板核酸中A1的3’末端邻接的部分序列B1非互补的序列、结合在A1’的5’末端。X2为如下引物:具有序列A2’,A2’为与上述模板核酸中的部分序列A2互补的序列,其3’区域具有与A2的5’区域的上述靶位点的第2碱基x2互补的碱基x2’。X1和X2均在3’区域具有与靶位点互补的碱基。利用这样的引物,在仅靶位点为第1碱基x1的模板的情况下,能够防止具有第2碱基x2的靶序列的误扩增。由此,能够抑制第2碱基x2的多态性的假阳性。

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