公开(公告)号：CN102134587B

公开(公告)日：2012-08-22

申请号：CN201010526222.9

申请日：2010-11-01

Applicant: 湖南科技大学

Inventor： 严明理 ,  刘丽莉 ,  向建华 ,  屠波 ,  陆赢 ,  谭勇俊

IPC: C12Q1/68

Abstract: 本发明涉及一种鉴定试剂盒，具体公开了一种在油菜种子发育极早期快速鉴定种皮颜色的鉴定方法。本发明的试剂盒及鉴定方法是依据在油菜黄黑籽发育极早期差异表达基因的序列设计的一对引物为主体的基础上而产生的。本发明采用反转录——聚酶链式反应（RT-PCR）技术，对油菜发育早期（开花4-5天后）种皮（去掉种脐部分）的特异RNA核酸片段进行的定性检测，简便快速，特异性好，灵敏度高，可以广泛应用于油菜种皮颜色育种中的极早期选择，从而提高育种效率，加快育种进程，节约育种成本，提高科学管理效率，具有很高的使用价值。

公开(公告)号：CN102318512A

公开(公告)日：2012-01-18

申请号：CN201110259377.5

申请日：2011-09-05

Applicant: 湖南科技大学

Inventor： 严明理 ,  刘丽莉 ,  向建华 ,  屠波

IPC: A01G7/06

Abstract: 本发明涉及一种调控油菜种皮颜色的方法。该方法是在油菜收割前8-15天，选择阴天或晴天的黄昏，用充分混匀后的含60-80mg/L脱落酸（AbscisicAcid）和0.5-0.8g/L的吐温40（Tween40）的溶液，喷洒油菜角果。通过该方法可以减少种皮色素的合成，降低种皮色素的含量，增加种皮透明度，促进油菜黄籽的形成，提高油菜的品质。

公开(公告)号：CN102318512B

公开(公告)日：2012-11-28

申请号：CN201110259377.5

申请日：2011-09-05

Applicant: 湖南科技大学

Inventor： 严明理 ,  刘丽莉 ,  向建华 ,  屠波

IPC: A01G7/06

Abstract: 本发明涉及一种调控油菜种皮颜色的方法。该方法是在油菜收割前8-15天，选择阴天或晴天的黄昏，用充分混匀后的含60-80mg/L脱落酸（AbscisicAcid）和0.5-0.8g/L的吐温40（Tween40）的溶液，喷洒油菜角果。通过该方法可以减少种皮色素的合成，降低种皮色素的含量，增加种皮透明度，促进油菜黄籽的形成，提高油菜的品质。

公开(公告)号：CN102134587A

公开(公告)日：2011-07-27

申请号：CN201010526222.9

申请日：2010-11-01

Applicant: 湖南科技大学

Inventor： 严明理 ,  刘丽莉 ,  向建华 ,  屠波 ,  陆赢 ,  谭勇俊

IPC: C12Q1/68

Abstract: 本发明涉及一种鉴定试剂盒，具体公开了一种在油菜种子发育极早期快速鉴定种皮颜色的鉴定方法。本发明的试剂盒及鉴定方法是依据在油菜黄黑籽发育极早期差异表达基因的序列设计的一对引物为主体的基础上而产生的。本发明采用反转录——聚酶链式反应（RT-PCR）技术，对油菜发育早期（开花4-5天后）种皮（去掉种脐部分）的特异RNA核酸片段进行的定性检测，简便快速，特异性好，灵敏度高，可以广泛应用于油菜种皮颜色育种中的极早期选择，从而提高育种效率，加快育种进程，节约育种成本，提高科学管理效率，具有很高的使用价值。

公开(公告)号：CN102827849B

公开(公告)日：2013-10-16

申请号：CN201210295306.5

申请日：2012-08-20

Applicant: 湖南科技大学

Inventor： 严明理 ,  刘丽莉 ,  向建华 ,  屠波 ,  王帅斌

IPC: C12N15/53 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种采用芥菜型油菜基因BAN和DFR共转化提高大肠杆菌中原花色素含量的方法。本发明从芥菜型油菜紫叶芥种皮的cDNA中克隆花色素还原酶BAN基因和4-二氢黄酮醇还原酶DFR基因，构建含BAN和DFR基因的原核表达载体pET-BAN-DFR，将BAN和DFR基因同时导入DH5α大肠杆菌。转化菌株在LB液体培养基中，25-37℃，150-250rpm(转/分钟)培养6-14小时候后，再在含黑色大豆种皮提取物(0.5-1.0g/L)的LB液体培养基中，25-37℃，150-250rpm震荡培养36-54小时后，离心收集菌体，采用DMACA-HCl法测定大肠杆菌所含的原花色素的量。本发明获得的转基因大肠杆菌中原花色素的含量显著提高，最高达到非转化对照菌株的19.8倍。

公开(公告)号：CN102827849A

公开(公告)日：2012-12-19

申请号：CN201210295306.5

申请日：2012-08-20

Applicant: 湖南科技大学

Inventor： 严明理 ,  刘丽莉 ,  向建华 ,  屠波 ,  王帅斌

IPC: C12N15/53 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种采用芥菜型油菜基因BAN和DFR共转化提高大肠杆菌中原花色素含量的方法。本发明从芥菜型油菜紫叶芥种皮的cDNA中克隆花色素还原酶BAN基因和4-二氢黄酮醇还原酶DFR基因，构建含BAN和DFR基因的原核表达载体pET-BAN-DFR，将BAN和DFR基因同时导入DH5α大肠杆菌。转化菌株在LB液体培养基中，25-37℃，150-250rpm(转/分钟)培养6-14小时候后，再在含黑色大豆种皮提取物(0.5-1.0g/L)的LB液体培养基中，25-37℃，150-250rpm震荡培养36-54小时后，离心收集菌体，采用DMACA-HCl法测定大肠杆菌所含的原花色素的量。本发明获得的转基因大肠杆菌中原花色素的含量显著提高，最高达到非转化对照菌株的19.8倍。