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公开(公告)号：CN103805594B
公开(公告)日：2016-06-29
申请号：CN201410056280.8
申请日：2014-02-17
Applicant: 湖南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种细胞杂交生产青蒿素的方法，其特征在于它包括黄花蒿腺毛细胞的分离收集、黄花蒿腺毛细胞及植物中的模式细胞株BY2细胞的原生质体制备、原生质体的融合、融合杂交细胞的培养、建立杂交细胞系五个步骤。本发明采用酶法分离收集黄花蒿叶片的腺毛细胞，与植物中的模式细胞株BY2细胞开展原生质体融合后进行细胞培养，从中筛选出具有持续分裂增殖能力又能合成青蒿素的细胞，构建黄花蒿腺毛细胞与BY2细胞的杂交细胞系，进行细胞的大规模培养后分离得到青蒿素。本发明在实施过程中选择性高，显著提高青蒿素产率的同时大大提高了生产效率；生产条件温和易控制，具有良好的工业生产应用前景。
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公开(公告)号：CN109337925B
公开(公告)日：2023-01-31
申请号：CN201811328722.4
申请日：2018-11-09
Applicant: 湖南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种以黄花蒿悬浮细胞系为受体的转AaADS基因提高黄花蒿中青蒿素含量的方法，构建AaADS基因在黄花蒿腺毛细胞过表达的载体，利用根癌农杆菌介导法转化黄花蒿悬浮细胞系，获得转基因黄花蒿植株。对转基因黄花蒿植株进行PCR基因扩增检测，并对转基因黄花蒿腺毛细胞发育情况及青蒿素含量进行观察与分析，筛选青蒿素含量显著提高的转基因黄花蒿植株，通过组织培养繁殖建立转基因高青蒿素含量的黄花蒿品系。本发明获得的转基因黄花蒿中青蒿素含量显著提高，过表达AaADS基因的黄花蒿中青蒿素的含量最高可达27.8mg/g DW，是非转化黄花蒿含量的2.24倍。本发明对于为青蒿素的规模化生产提供高产、稳定新药源具有重要意义。
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公开(公告)号：CN108531435A
公开(公告)日：2018-09-14
申请号：CN201810316006.8
申请日：2018-04-10
Applicant: 湖南农业大学
Abstract: 一种枯草芽孢杆菌互补培养的菌种加密性菌剂生产方法，包括以下步骤：基因编辑法定向突变和/或敲除生产枯草芽孢杆菌的特定营养基因，构建基因编辑载体；转化目标枯草芽孢杆菌，筛选成功基因编辑的特定营养物依赖型菌作为生产菌；筛选出上述特定营养物的普通枯草芽孢杆菌作为营养菌；分别培养所述生产菌与营养菌，作为菌剂生产发酵的种子菌；将营养菌和生产菌混合进行菌剂生产的规模培养即得。本发明采用基因编辑法对重要商用价值的枯草芽孢杆菌生产菌进行特定营养物质合成基因的定向突变和敲除，可以有效培育出特定营养物质依赖型的生产菌菌种，降低商业菌剂中菌种扩散和流失的风险。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104059940B
公开(公告)日：2016-03-16
申请号：CN201410278312.9
申请日：2014-06-20
Applicant: 湖南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种转iaaM基因提高黄花蒿中青蒿素含量的方法，构建iaaM基因在黄花蒿腺毛细胞特异表达的载体，利用根癌农杆菌介导法转化黄花蒿，获得经PCR检测的转基因黄花蒿植株。对转基因黄花蒿植株进行PCR基因扩增检测，并对转基因黄花蒿腺毛发育细胞情况及青蒿素含量进行观察与分析，筛选青蒿素含量显著提高的转基因黄花蒿植株，通过组织培养繁殖建立转基因高青蒿素含量的黄花蒿品系。本发明获得的转基因黄花蒿中青蒿素含量显著提高，最高可达非转化黄花蒿含量的1.5倍，本发明对于为青蒿素的规模化生产提供高产、稳定新药源具有重要意义。
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公开(公告)号：CN109321594B
公开(公告)日：2023-11-03
申请号：CN201811336229.7
申请日：2018-11-09
Applicant: 湖南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种以黄花蒿悬浮细胞系为受体的转iaaM基因提高黄花蒿中青蒿素含量的方法，构建iaaM基因在黄花蒿腺毛细胞特异表达的载体，利用根癌农杆菌介导法转化黄花蒿悬浮细胞系，获得转基因黄花蒿植株。对转基因黄花蒿植株进行PCR基因扩增检测，并对转基因黄花蒿腺毛细胞发育情况及青蒿素含量进行观察与分析，筛选青蒿素含量显著提高的转基因黄花蒿植株，通过组织培养繁殖建立转基因高青蒿素含量的黄花蒿品系。本发明获得的转基因黄花蒿中青蒿素含量显著提高，转iaaM基因的黄花蒿中青蒿素的含量最高可达21.6mg/g DW，是非转化黄花蒿含量的1.8倍。本发明对于为青蒿素的规模化生产提供高产、稳定新药源具有重要意义。
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公开(公告)号：CN109337925A
公开(公告)日：2019-02-15
申请号：CN201811328722.4
申请日：2018-11-09
Applicant: 湖南农业大学
CPC classification number: C12N15/8243 , C12N9/88 , C12Y402/03024
Abstract: 本发明公开了一种以黄花蒿悬浮细胞系为受体的转AaADS基因提高黄花蒿中青蒿素含量的方法，构建AaADS基因在黄花蒿腺毛细胞过表达的载体，利用根癌农杆菌介导法转化黄花蒿悬浮细胞系，获得转基因黄花蒿植株。对转基因黄花蒿植株进行PCR基因扩增检测，并对转基因黄花蒿腺毛细胞发育情况及青蒿素含量进行观察与分析，筛选青蒿素含量显著提高的转基因黄花蒿植株，通过组织培养繁殖建立转基因高青蒿素含量的黄花蒿品系。本发明获得的转基因黄花蒿中青蒿素含量显著提高，过表达AaADS基因的黄花蒿中青蒿素的含量最高可达27.8mg/g DW，是非转化黄花蒿含量的2.24倍。本发明对于为青蒿素的规模化生产提供高产、稳定新药源具有重要意义。
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公开(公告)号：CN109321594A
公开(公告)日：2019-02-12
申请号：CN201811336229.7
申请日：2018-11-09
Applicant: 湖南农业大学
CPC classification number: C12N15/8243 , A01H4/00 , C12N15/65
Abstract: 本发明公开了一种以黄花蒿悬浮细胞系为受体的转iaaM基因提高黄花蒿中青蒿素含量的方法，构建iaaM基因在黄花蒿腺毛细胞特异表达的载体，利用根癌农杆菌介导法转化黄花蒿悬浮细胞系，获得转基因黄花蒿植株。对转基因黄花蒿植株进行PCR基因扩增检测，并对转基因黄花蒿腺毛细胞发育情况及青蒿素含量进行观察与分析，筛选青蒿素含量显著提高的转基因黄花蒿植株，通过组织培养繁殖建立转基因高青蒿素含量的黄花蒿品系。本发明获得的转基因黄花蒿中青蒿素含量显著提高，转iaaM基因的黄花蒿中青蒿素的含量最高可达21.6mg/g DW，是非转化黄花蒿含量的1.8倍。本发明对于为青蒿素的规模化生产提供高产、稳定新药源具有重要意义。
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公开(公告)号：CN108531435B
公开(公告)日：2020-09-22
申请号：CN201810316006.8
申请日：2018-04-10
Applicant: 湖南农业大学
Abstract: 一种枯草芽孢杆菌互补培养的菌种加密性菌剂生产方法，包括以下步骤：基因编辑法定向突变和/或敲除生产枯草芽孢杆菌的特定营养基因，构建基因编辑载体；转化目标枯草芽孢杆菌，筛选成功基因编辑的特定营养物依赖型菌作为生产菌；筛选出上述特定营养物的普通枯草芽孢杆菌作为营养菌；分别培养所述生产菌与营养菌，作为菌剂生产发酵的种子菌；将营养菌和生产菌混合进行菌剂生产的规模培养即得。本发明采用基因编辑法对重要商用价值的枯草芽孢杆菌生产菌进行特定营养物质合成基因的定向突变和敲除，可以有效培育出特定营养物质依赖型的生产菌菌种，降低商业菌剂中菌种扩散和流失的风险。
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