利用TALE转录抑制子在哺乳动物细胞中模块化构建合成基因线路的试剂盒

    公开(公告)号:CN104630267B

    公开(公告)日:2017-10-31

    申请号:CN201410342350.6

    申请日:2014-07-17

    Applicant: 清华大学

    Abstract: 本发明的目的是提供利用TALE转录抑制子在哺乳动物细胞中模块化构建合成基因线路的试剂盒。本发明保护实现两种蛋白可调控式表达的试剂盒,包括具有表达盒甲的重组载体甲、具有表达盒乙的重组载体乙和具有表达盒丙的重组载体丙;表达盒甲包括:反馈元件的编码序列、启动子甲、通过自剪切多肽连接的蛋白甲和TALER蛋白甲的编码基因、靶序列甲(包括shRNA1的靶序列);表达盒乙包括:反馈元件的编码序列、启动子乙、通过自剪切多肽连接的蛋白乙和TALER蛋白乙的编码基因、靶序列乙(包括shRNA2的靶序列);表达盒丙包括组成启动子和激活元件的编码序列。将重组载体甲、乙和丙导入宿主细胞,通过加入shRNA1或shRNA2调控蛋白甲和乙表达。

    对动物受精卵进行电转染基因编辑的方法及其应用

    公开(公告)号:CN113881708B

    公开(公告)日:2024-08-06

    申请号:CN202111170536.4

    申请日:2021-10-08

    Applicant: 清华大学

    Abstract: 本发明提出了对动物受精卵进行电转染基因编辑的方法及其应用。该方法包括:(1)选择S期以前的动物受精卵进行透明带弱化处理;(2)将外源物质与经过透明带弱化处理的动物受精卵混合后,进行电穿孔转染处理,其中,所述外源物质包括Cas9蛋白和sgRNA。利用该方法能有效实现对动物胚胎进行电转染并基因编辑。

    利用TALE转录抑制子在哺乳动物细胞中模块化构建合成基因线路

    公开(公告)号:CN104611365A

    公开(公告)日:2015-05-13

    申请号:CN201410342334.7

    申请日:2014-07-17

    Applicant: 清华大学

    Abstract: 本发明的目的是提供利用TALE转录抑制子在哺乳动物细胞中模块化构建合成基因线路。本发明保护实现两种蛋白可调控式表达的方法:表达盒甲包括:反馈元件的编码序列、启动子甲、通过自剪切多肽连接的蛋白甲和TALER蛋白甲的编码基因、靶序列甲(包括shRNA1的靶序列);表达盒乙包括:反馈元件的编码序列、启动子乙、通过自剪切多肽连接的蛋白乙和TALER蛋白乙的编码基因、靶序列乙(包括shRNA2的靶序列);表达盒丙包括组成型启动子和激活元件的编码序列;将具有表达盒甲的重组载体甲、具有表达盒乙的重组载体乙和具有表达盒丙的重组载体丙导入宿主细胞,通过加入shRNA1或shRNA2调控蛋白甲和蛋白乙的表达。

    TALER蛋白通过空间位阻发挥转录抑制作用及其应用

    公开(公告)号:CN104178506A

    公开(公告)日:2014-12-03

    申请号:CN201410341963.8

    申请日:2014-07-17

    CPC classification number: C07K14/195 C12N15/113 C12Q1/68

    Abstract: 本发明公开了TALER蛋白通过空间位阻发挥转录抑制作用及其应用。本发明保护TALER蛋白在使目的启动子失活中的应用;所述目的启动子的上游和下游各具有至少一个所述TALER蛋白的靶点,或,所述目的启动子的上游不具有所述TALER蛋白的靶点但其下游具有至少一个所述TALER蛋白的靶点。本发明还保护TALER蛋白在使目的蛋白的编码基因失活中的应用;所述目的蛋白的编码基因由目的启动子启动表达;所述目的启动子的上游和下游各具有至少一个所述TALER蛋白的靶点,或,所述目的启动子的上游不具有所述TALER蛋白的靶点但其下游具有至少一个所述TALER蛋白的靶点。本发明对于蛋白的调控表达方式和功能研究具有重大价值。

    一种体外转录副产物在核酸药物质控中的用途及其应用

    公开(公告)号:CN118222670A

    公开(公告)日:2024-06-21

    申请号:CN202311360886.6

    申请日:2023-10-19

    Applicant: 清华大学

    Inventor: 赵哲 李寅青

    Abstract: 本发明公开一种靶RNA的体外转录副产物在核酸药物质控中的用途及其在核酸药物开发和生产中的应用。所述核酸药物包括所述靶RNA,所述靶RNA是通过体外转录获得的,所述靶RNA的体外转录副产物为所述核酸药物的质控杂质,所述靶RNA的体外转录副产物为与所述靶RNA的部分序列反向互补或全部序列反向互补的RNA分子。利用本发明用途可得到纯度高、质量好的目标产物RNA。该目标产物RNA安全性好、翻译效率高,基于其制备的本发明核酸药物副作用低、药效好。因此,本发明用途对于明确核酸药物质量控制参数,开发核酸药物生产工艺,提高核酸药物生产质量标准,开发生产安全有效的核酸药物具有重要指导意义。

    一种一体化自助式核酸检测装置及其使用方法

    公开(公告)号:CN111647498A

    公开(公告)日:2020-09-11

    申请号:CN202010447201.1

    申请日:2020-05-25

    Applicant: 清华大学

    Abstract: 本发明涉及一种一体化自助式核酸检测装置及其使用方法,该装置包括:卡盒,其上形成有活塞腔室、样本接收腔室、试剂腔室和回收腔室;反应芯片,其上表面形成有两个反应池;弹性膜,将反应芯片键合在卡盒底部;样本接收腔室和试剂腔室通过第一单向阀结构与一反应池相连通,试剂腔室和回收腔室通过第二单向阀结构与另一反应池相连通。本发明只需4步简单的推杆推拉动作即可完成核酸检测的全部流程,不仅无需专业培训和特殊实验室条件,也无需移液枪、温度循环仪器等设备,大大简化了核酸检测的操作步骤,降低了对操作人员和操作场所的要求,可在家庭、社区诊所进行普及应用,实现疫情防控期间的实时筛查检测、以及个人日常健康状况监测。

    利用TALE转录抑制子在哺乳动物细胞中模块化构建合成基因线路的试剂盒

    公开(公告)号:CN104630267A

    公开(公告)日:2015-05-20

    申请号:CN201410342350.6

    申请日:2014-07-17

    Applicant: 清华大学

    Abstract: 本发明的目的是提供利用TALE转录抑制子在哺乳动物细胞中模块化构建合成基因线路的试剂盒。本发明保护实现两种蛋白可调控式表达的试剂盒,包括具有表达盒甲的重组载体甲、具有表达盒乙的重组载体乙和具有表达盒丙的重组载体丙;表达盒甲包括:反馈元件的编码序列、启动子甲、通过自剪切多肽连接的蛋白甲和TALER蛋白甲的编码基因、靶序列甲(包括shRNA1的靶序列);表达盒乙包括:反馈元件的编码序列、启动子乙、通过自剪切多肽连接的蛋白乙和TALER蛋白乙的编码基因、靶序列乙(包括shRNA2的靶序列);表达盒丙包括组成启动子和激活元件的编码序列。将重组载体甲、乙和丙导入宿主细胞,通过加入shRNA1或shRNA2调控蛋白甲和乙表达。

    一种筛选蛋白质凝聚体结合位点的方法及其用途

    公开(公告)号:CN118186053A

    公开(公告)日:2024-06-14

    申请号:CN202410256425.2

    申请日:2024-03-06

    Applicant: 清华大学

    Inventor: 李寅青 贾泽然

    Abstract: 本发明涉及生物技术领域,本发明提供一种筛选蛋白质凝聚体潜在结合位点的方法,更具体的,本发明提供了一种利用二代测序相关技术检测染色质相关凝聚体在全基因组层面上的潜在结合位点的方法,为后继研发异常凝聚体的药物的靶点的筛选奠定基础。本发明的方法可以用于在细胞发育、细胞药理反应等动态过程中检测染色质相关凝聚体结合的动态变化,从而进一步理解细胞发育的生物学基础、药理反应机制,用于新药筛选等,为后继研发异常凝聚体的药物的靶点的筛选奠定基础,具有巨大的应用价值。

    基因编辑细胞脱靶检测的方法

    公开(公告)号:CN116024324B

    公开(公告)日:2024-05-14

    申请号:CN202310020693.X

    申请日:2023-01-06

    Applicant: 清华大学

    Inventor: 朱明 李寅青 蓝勋

    Abstract: 本发明提出了基因编辑细胞脱靶检测的方法,所述方法包括:(1)对细胞进行基因编辑,获得的基因编辑细胞中含有蛋白‑单链DNA复合物;(2)从所述基因编辑细胞中分离出单链DNA;(3)将所述单链DNA构建测序文库,对所述测序文库进行测序,获得测序结果;(4)将所述测序结果与参考序列进行比对分析,确定脱靶信息。利用本发明的方法可以确定脱靶信息,具有高准确性、高灵敏度和高普适性等特点,适于广泛应用。

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