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公开(公告)号：CN117384808A
公开(公告)日：2024-01-12
申请号：CN202311171120.3
申请日：2023-09-11
Applicant: 海南大学
Abstract: 本发明公开了一种达卡气单胞菌突变株ΔarnA和双突变株ΔugdΔarnA及其构建方法和应用。所述的达卡气单胞菌突变株是在达卡气单胞菌野生株的基础上，缺失了arnA基因或者ugd基因以及arnA基因双基因后得到的。实验结果表明达卡气单胞菌缺失株对多粘菌素的抗性减弱，对斑马鱼的毒力减弱，且用缺失株进行免疫保护能提高斑马鱼在攻毒试验中的存活率。因此，本发明的提出有助于提升对达卡气单胞菌致病机制和耐药机制的认识，为免疫防治中的靶基因选择提供参考，也能够为促进鳄鱼养殖行业的健康发展，保护鳄鱼养殖户的财产，提供有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN117106686A
公开(公告)日：2023-11-24
申请号：CN202311237566.1
申请日：2023-09-22
Applicant: 海南大学
Abstract: 本发明公开了一种鳄鱼源达卡气单胞菌phoBR和kdpE基因缺失株、回补株及其构建方法和应用。所述的phoBR和kdpE基因缺失株是在达卡气单胞菌野生株的基础上同时缺失了phoBR和kdpE基因后得到的；所述的回补株是在所述的基因缺失株的基础上回补表达kdpE基因后得到的。实验证明，所述的phoBR和kdpE基因缺失株及其回补株的遗传稳定。与野毒株和ΔphoBR缺失株相比，ΔphoBRΔkdpE缺失株生长无差异，但对抗菌肽的敏感性增强。免疫保护试验表明，ΔphoBRΔkdpE缺失株及其回补株的免疫保护率分别为43.30％以及55.60％。本发明为鳄鱼达卡气单胞菌病的减毒活疫苗的研究提供了技术手段。
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公开(公告)号：CN109825522B
公开(公告)日：2022-09-23
申请号：CN201910201916.6
申请日：2019-03-18
Applicant: 海南大学
Abstract: 本发明公开一种基于CRISPR/Cas9和λ‑Red的无痕化双靶点基因组编辑系统，其特征在于：1.pKS9分子量11,681kb，为温敏性质粒。含有基因：受四环素诱导的cas9和recX基因；受阿拉伯糖诱导的λ‑Red完整αβγ重组酶基因；抗性基因ampr。2.pCSK分子量2,914 kb，含有两个用于特异性识别基因组的sgRNA插入位点；两个受鼠李糖诱导、用于自身质粒消除的间隔区gRNA序列；抗性基因kanr。3.在同源臂27bp时，同时双点突变效率皆在92%以上；在同源臂40bp时，同时双基因的1kb替换效率在60%以上，当大片段基因替换和点突变同时进行时，各自的编辑效率不受影响。
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公开(公告)号：CN110423827A
公开(公告)日：2019-11-08
申请号：CN201910300214.3
申请日：2019-04-15
Applicant: 海南大学
IPC: C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12Q1/14
Abstract: 本发明公开一种以肽聚糖水解酶pcsB基因为靶序列的环介导等温扩增快速检测无乳链球菌的方法，所述引物含SEQID.NO.1-2的内引物，SEQID.NO.3-4的外引物和SEQID.NO.5的环引物。其特征在于：1）64°C,1小时LAMP反应，通过实时浊度仪可有效检测无乳链球菌的最低基因组模板量为1 pg，灵敏度是普通PCR电泳分析和荧光PCR的100倍。2）以SYBR Green I为显色试剂，LAMP反应1-3小时可对1 ng模板的无乳链球菌进行准确检测。
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公开(公告)号：CN117535214B
公开(公告)日：2025-05-23
申请号：CN202311310100.X
申请日：2023-10-10
Applicant: 海南大学
Abstract: 本发明公开了达卡气单胞菌ugd及phoB基因单双缺失突变株、回补株及其构建方法和应用。本发明通过无痕敲除的方法成功构建了达卡气单胞菌Δugd基因单缺失突变株以及达卡气单胞菌ΔugdΔphoB基因双缺失突变株，并通过无缝克隆方式成功构建回补株ΔugdΔphoB+CphoB。研究发现，相比较野生株，Δugd突变株(LD50)毒力下降了73倍(减少17.4倍)，ΔugdΔphoB突变株(LD50)毒力下降了7.45倍。Δugd突变株的免疫保护率为60％，ΔugdΔphoB双突变株的免疫保护率为36.7％。可以作为候选弱毒疫苗来抵抗野生型达卡气单胞菌C160501菌株的感染。本发明的提出为达卡气单胞菌病减毒活疫苗的研究提供了技术手段。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN117384808B
公开(公告)日：2025-01-24
申请号：CN202311171120.3
申请日：2023-09-11
Applicant: 海南大学
Abstract: 本发明公开了一种达卡气单胞菌突变株ΔarnA和双突变株ΔugdΔarnA及其构建方法和应用。所述的达卡气单胞菌突变株是在达卡气单胞菌野生株的基础上，缺失了arnA基因或者ugd基因以及arnA基因双基因后得到的。实验结果表明达卡气单胞菌缺失株对多粘菌素的抗性减弱，对斑马鱼的毒力减弱，且用缺失株进行免疫保护能提高斑马鱼在攻毒试验中的存活率。因此，本发明的提出有助于提升对达卡气单胞菌致病机制和耐药机制的认识，为免疫防治中的靶基因选择提供参考，也能够为促进鳄鱼养殖行业的健康发展，保护鳄鱼养殖户的财产，提供有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN119014332A
公开(公告)日：2024-11-26
申请号：CN202411119607.1
申请日：2024-08-15
Applicant: 海南大学
Abstract: 本发明公开了样本检测技术领域的一种智能小鼠肠道菌群检测用样本处理装置，包括控制系统和样本处理组件，样本处理组件包括处理箱，处理箱内侧壁固定连接有用于监测小鼠生活习性的摄像头，控制系统用于接收摄像头信号；处理箱内部固定连接有若干采集箱，处理箱底部固定连接有若干支撑杆；采集箱内均设有用于帮助小鼠排泄的助力组件。本发明通过自动化的采集，控制系统负责监测、预测小鼠的排便行为，并控制电动收缩带和按压块的工作，减少因人为因素造成的样本混淆和其他错误，确保样本处理的准确性。
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公开(公告)号：CN117535214A
公开(公告)日：2024-02-09
申请号：CN202311310100.X
申请日：2023-10-10
Applicant: 海南大学
Abstract: 本发明公开了达卡气单胞菌ugd及phoB基因单双缺失突变株、回补株及其构建方法和应用。本发明通过无痕敲除的方法成功构建了达卡气单胞菌Δugd基因单缺失突变株以及达卡气单胞菌ΔugdΔphoB基因双缺失突变株，并通过无缝克隆方式成功构建回补株ΔugdΔphoB+CphoB。研究发现，相比较野生株，Δugd突变株(LD50)毒力下降了73倍(减少17.4倍)，ΔugdΔphoB突变株(LD50)毒力下降了7.45倍。Δugd突变株的免疫保护率为60％，ΔugdΔphoB双突变株的免疫保护率为36.7％。可以作为候选弱毒疫苗来抵抗野生型达卡气单胞菌C160501菌株的感染。本发明的提出为达卡气单胞菌病减毒活疫苗的研究提供了技术手段。
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公开(公告)号：CN119020228B
公开(公告)日：2025-04-04
申请号：CN202411380863.6
申请日：2024-09-30
Applicant: 海南大学
IPC: C12N1/20 , A61K35/742 , A61P31/04 , C12R1/07
Abstract: 本发明提供了鳄鱼源贝莱斯芽孢杆菌L09株及其在水产养殖中的应用，鳄鱼源贝莱斯芽孢杆菌L09株，已于2024年7月31日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址为中国.武汉.武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:M 20241703，分类命名为Bacillus velezensis。鳄鱼源贝莱斯芽孢杆菌L09株具有防止达卡气单胞菌感染的斑马鱼的体内体外抗菌活性，在水产养殖中具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN118879600A
公开(公告)日：2024-11-01
申请号：CN202410970620.1
申请日：2024-07-19
Applicant: 海南大学
Abstract: 本发明提供了达卡气单胞菌表面多糖合成基因缺失的突变株、回补株及其构建方法和应用，所述达卡气单胞菌为A.dhakensis C160501，所述表面多糖合成基因为ugd、ugd2和cap1J基因中的一种或几种，ugd基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，ugd2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，cap1J基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。通过对相关基因的敲除，构建鳄鱼源达卡气单胞菌基因缺失株，比较分析不同的基因缺失对达卡气单胞菌菌体所造成的影响，为达卡气单胞菌相关疾病的防治提供新的思路，为药物和疫苗的开发提供新的靶点及思路。
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